%0 Journal Article %A 李晨晨 %A 李梦丽 %A 江波 %A 张涛 %T 2'-岩藻糖基乳糖的生物合成菌株构建及发酵条件研究 %D 2021 %R 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.025160 %J 食品与发酵工业 %P 10-17 %V 47 %N 3 %X 2'-岩藻糖基乳糖(2'-fucosyllactose,2'-FL)可作为益生元添加到婴幼儿配方奶粉中,对婴幼儿肠道菌群和免疫系统的发育至关重要。通过共表达L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶(L-fucokinase/GDP-L-fucose pyrophosphorylase,fkp)基因和α-1,2-岩藻糖基转移酶(α-1,2-fucosyltransferase,futC)基因,以大肠杆菌Escherichia coli BL21star(DE3)为出发菌株,异源表达脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)和幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)来源的fkpfutC基因,建立了2'-FL的合成途径。通过CRISPR/Cas9系统敲除β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)和UDP-葡萄糖脂质载体转移酶(UDP-glucose lipid carrier transferase,WcaJ)基因,阻断中间代谢产物的分解,探究该类基因对2'-FL合成的影响。实验结果显示:单敲除LacZ基因促进2'-FL的产量并提高1.88倍,对菌体生长影响不显著;叠加敲除基因LacZWcaJ后,2'-FL的产量提高4.89倍,且对菌体生长没有显著影响。通过摇瓶发酵优化,确定了发酵条件为:采用限定性培养基(DM培养基),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导浓度为0.2 mmol/L,诱导温度为25 ℃,接种量为5%。在此条件下摇瓶培养,2'-FL产量最高可达1.44 g/L。研究表明敲除β-半乳糖苷酶和UDP-葡萄糖脂质载体转移酶基因可显著提高2'-FL产量,为扩大其工业化生产提供参考依据。 %U http://sf1970.cnif.cn/CN/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.025160