%0 Journal Article %A 周艳杰 %A 耿鹏 %A 时祎 %A 顾正华 %A 辛瑜 %A 石贵阳 %A 张梁 %T 嗜热玫瑰红球菌嗜热脂肪酶的重组表达与酶学性质研究 %D 2021 %R 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.027242 %J 食品与发酵工业 %P 16-22 %V 47 %N 13 %X 嗜热脂肪酶能克服常温酶生物学性质不稳定的缺陷,在工业应用中有较大的优势,因而成为最近研究的热点。通过合成嗜热玫瑰红球菌Thermomicrobium roseum DSM 5159中的预测脂肪酶基因,在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,并对该酶进行分离纯化和酶学性质表征。重组脂肪酶的熔融温度Tm和焓变ΔH分别为97.53 ℃和1 637 kJ/mol,二级结构由56.3% α-螺旋、4.3% β-折叠、19.9% β-转角和20.3%的无规则卷曲组成。以对硝基苯酚棕榈酸酯为底物时,脂肪酶最适反应温度为85 ℃,最适反应pH为8.5,在80 ℃孵育12 h后酶活力保留率在80%以上,具有良好的热稳定性;脂肪酶对实验中大部分有机溶剂具有较强的耐受力;K+和Ca2+对酶活力有促进作用;动力学研究证实以对硝基苯酚棕榈酸酯为底物时,亲和力最高,米氏常数Km为0.01 mmol/L,催化常数kcat为3.0 s-1,kcat/Km为299.0 L/(mmol·s)。研究结果有助于更好地了解嗜热菌脂肪酶的基因和酶学性质,为其在生物柴油合成、洗涤剂及高温环境工业等多领域的应用奠定基础。 %U http://sf1970.cnif.cn/CN/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.027242