泡菜在中国已拥有3 000多年的历史[1],是中国传统发酵蔬菜食品,其富含有机酸、维生素、膳食纤维等营养物质,通常作为配菜或开胃菜[2]。随着富氮化肥在农业中的广泛应用,新鲜蔬菜从土壤中吸收大量的氮肥并将其转化为硝酸盐,而硝酸盐被蔬菜表面附着的微生物或蔬菜固有的硝酸还原酶还原成亚硝酸盐,造成亚硝酸盐的积累[3]。由于原料、工艺差异,不同泡菜中的亚硝酸盐含量可能存在很大差异[4]。
亚硝酸盐具有很强的氧化能力,短时间内过量摄入会导致机体内血红蛋白结构发生改变,引起中毒,甚至影响人体血液系统,干扰维生素A的吸收,从而引发维生素A缺乏症[4]。如何降低泡菜中亚硝酸盐的含量已成为国内外学者研究的关切点。本文拟重点分析与探讨乳酸菌降解亚硝酸盐的机制与影响因素,归纳总结现有降低泡菜中亚硝酸盐含量的方法,并对乳酸菌在泡菜中的应用进行展望。
乳酸菌对亚硝酸盐的降解机制已引起研究学者们的广大关注。相较于自然发酵,接种魏斯氏菌KACC 15510的发酵泡菜,其“亚硝峰”峰值降低,且发酵蔬菜的口感与风味明显提高[5]。张庆芳等[6]研究认为乳酸菌降解亚硝酸盐有2个阶段,即产酸降解与产降解。发酵前期pH>4.0时,以乳酸菌产亚硝酸盐还原酶降解为主;发酵后期pH<4.0时,以乳酸菌产乳酸降解为主,并且此时发酵环境中pH较低,不利于产亚硝酸盐的微生物生长,从而抑制亚硝酸盐的生成。同时,LIU等[7]研究发现,粪肠球菌Y31产生的细菌素Y3可促进乳酸菌菌群增殖,使亚硝酸盐含量维持在较低水平。迄今为止,关于乳酸菌降解亚硝酸盐机制的研究主要集中于产酸、产酶和产乳酸菌素降解3个方向,如图1所示。
图1 乳酸菌降解亚硝酸盐的可能机制
Fig.1 The possible degradation mechanism of nitrite by lactic acid bacteria in pickled vegetables
在泡菜发酵过程中,亚硝酸盐的含量总体呈先升高后降低的趋势,乳酸菌的产酸特性,特别是乳酸与乙酸的产生对亚硝酸盐的降解起着重要作用。乳酸菌生长代谢过程中释放的大量H+进入发酵体系中,与发生非酶歧化反应,生成含氮化合物,从而降解亚硝酸盐[8]。泡菜发酵环境中的pH值与亚硝酸盐含量呈显著正相关,而pH值与乳酸菌数量呈显著负相关。乳酸菌产酸既能促进亚硝酸盐的降解,亦能抑制其他微生物的生长,且随着卤水酸度的增加,细菌多样性降低;其中,耐乙酸乳杆菌为最大优势菌,其次是短乳杆菌,且均与卤水酸度呈正相关[9]。
乳酸菌在发酵过程中会产生丰富的代谢产物,部分乳酸菌可产生能将亚硝酸盐还原为NO的亚硝酸盐还原酶,其降解路径为研究发现,在植物乳杆菌、短乳杆菌和鼠李糖乳杆菌中短乳杆菌降解亚硝酸盐的能力最强,可能是因该菌株含有亚硝酸还原酶基因,能在的诱导下产生亚硝酸还原酶[11]。王盼等[12]将植物乳杆菌DMDL9010中亚硝酸盐还原酶基因转化到大肠杆菌上,并诱导表达了亚硝酸盐还原酶,经诱导的工程菌可降解底物中超过90%的亚硝酸盐。目前,乳酸菌产酶降解的研究主要集中于从不同乳酸菌中提取亚硝酸盐还原酶,并研究其理化性质或对其进行基因克隆,但关键酶的细胞定位、降解途径和降解机制尚需开展进一步研究。
部分乳酸菌在代谢过程中除会产生有机酸和亚硝酸盐还原酶外,同时也会产生具有抑制其他微生物生长的乳酸菌素。乳酸菌素是一类由乳酸菌核糖体产生并分泌到胞外的抗菌肽,能抑制亚硝酸盐的生成[7]。FANG等[13]从自然发酵的食品中分离得到4株具有抗菌活性的乳酸菌,其中棒状乳杆菌BBE-H3降低亚硝酸盐含量的能力最强,该菌株能产生针对丝状霉菌和酵母菌的蛋白类抗菌化合物,抑制其他产亚硝酸盐菌株的生长,从而抑制硝酸盐还原成亚硝酸盐。接种粪肠球菌Y31发酵生产泡菜过程中产生的细菌素Y3可有效控制泡菜中致腐和病原微生物的生长,促进乳酸菌菌群增殖,减少杂菌数量,加快发酵速度,使发酵液中亚硝酸盐含量维持在较低水平。因此,粪肠球菌Y31不仅可有效控制泡菜的腐败,还可降低亚硝酸盐含量[7]。
泡菜制作过程中不同的发酵原料、温度、pH、时间、食盐浓度以及发酵罐的材质等均会影响体系中微生物尤其是乳酸菌的生长,最终影响泡菜中亚硝酸盐的含量。不同发酵条件下泡菜的生产及亚硝酸盐的降解情况如表1所示。
表1 不同发酵条件与发酵方式对泡菜亚硝酸盐变化的影响
Table 1 Effects of different fermentation conditions and methods on nitrite change in pickled vegetables
原料种类发酵条件温度/℃pH时间/d盐质量分数/%容器发酵方式亚硝酸盐变化情况参考文献卷心菜10/15/25/306.7203陶瓷罐自然发酵发酵初期,温度越高,亚硝酸盐含量越低;发酵后期,低温更有利于促进亚硝酸盐降解。WANG等[17]卷心菜255.074/6/8/10玻璃罐自然发酵/接种发酵(短乳杆菌AR123)/接种发酵(商业发酵剂)/混合接种(短乳杆菌AR123+商业发酵剂)随着盐浓度增加,亚硝酸盐降解率迅速下降;发酵第3天,盐质量分数为6%时其自然发酵、短乳杆菌AR123接种发酵、商业发酵剂接种发酵和混合接种发酵的亚硝酸盐含量分别为0.83、3.05、0.88、17.92 mg/kg,且混合接种发酵中未出现明显“亚硝峰”。XIA等[28]卷心菜室温—74—自然发酵/接种发酵(植物乳杆菌NCU116)自然发酵和接种发酵的亚硝酸盐含量均先升高后降低,且接种发酵更能促进亚硝酸盐的降解,使亚硝酸盐含量下降更快。XIONG等[23]卷心菜10/15/20/255.6306陶瓷罐自然发酵随着温度升高,亚硝酸盐含量先升高后降低,20 ℃时亚硝酸盐含量最高(0.51 mg/kg);发酵后期,亚硝酸盐含量(<0.02 mg/kg)显著低于国家食品安全标准。HE等[24]青菜头室温5.24a5.87b114—自然发酵/混合接种发酵(胃肠膜魏斯氏菌C2-2+短乳杆菌ZP11-2+肠系膜明串珠菌21861)自然发酵与混合接种发酵均在第1天出现“亚硝峰”,混合接种发酵“亚硝峰”峰值(8.97 mg/kg)明显低于自然发酵峰值(22.16 mg/kg);第2天后,亚硝酸盐含量显著下降并趋于稳定。LUO等[25]萝卜室温6.5316玻璃罐/陶瓷罐/塑料罐自然发酵发酵第31天,塑料罐中卤水的亚硝酸盐含量最高(2.50 mg/kg),而玻璃罐中卤水的亚硝酸盐含量最低(1.90 mg/kg)。LIU等[21]萝卜室温3.5316陶瓷罐自然发酵发酵第4天出现“亚硝峰”(44.17 mg/kg),第8天后,亚硝酸盐含量显著下降至极低水平(1.0 mg/kg)并趋于稳定。RAO等[26]萝卜室温6.5126(卤水)+6(盐水)玻璃罐/陶瓷罐/塑料罐自然发酵发酵第2天出现“亚硝峰”,且陶瓷罐中发酵泡菜的峰值最高(59.73 mg/kg),显著高于玻璃罐与塑料罐中泡菜;第4天后,3种容器内泡菜的亚硝酸盐含量均显著下降并趋于稳定。LIU等[27]萝卜255.477玻璃罐自然发酵/接种发酵(巨大芽孢杆菌L222)自然发酵与接种发酵均在第1天出现“亚硝峰”,而后显著降低至极低水平(0.05~0.10 mg/kg);接种发酵的亚硝酸盐含量低于自然发酵。LUO等[28]V(胡萝卜)∶V(芹菜)∶V(卷心菜)=8∶1∶1256.474—自然发酵/混合接种发酵(植物乳杆菌LV02+小扁豆乳酸杆菌LV73)自然发酵与混合接种发酵均在第1天出现“亚硝峰”,接种发酵的亚硝酸盐含量(0.44 mg/kg)显著低于自然发酵(2.18 mg/kg),而后逐渐下降并趋于稳定。CHEN等[29]大白菜376.872锥形瓶(玻璃)自然发酵/接种发酵(粪肠球菌Y31)自然发酵第1天出现“亚硝峰”(36.6 mg/kg),接种发酵第4天出现“亚硝峰”(9.9 mg/kg);接种发酵的亚硝酸盐含量始终显著低于自然发酵。LIU等[7]大白菜18~20—300.5/1.5/2.5/3.5陶瓷罐混合接种发酵(肠系膜明串珠菌ORC2+植物乳杆菌HBUAS 51041)发酵第3天出现“亚硝峰”,峰值由高到低依次为0.5%、3.5%、1.5%、2.5%盐质量浓度的添加组,发酵结束时均低于20 mg/kg。YANG等[19]大白菜156.4301陶瓷罐自然发酵发酵初期亚硝酸盐含量呈上升趋势,第3天出现“亚硝峰”(8.60 mg/kg),而后亚硝酸盐含量显著下降并趋于稳定(0.36 mg/kg)。SONG等[30]豇豆25—76陶瓷罐接种发酵(魏斯氏菌WC018)/接种发酵(植物乳杆菌LP067)/混合接种发酵(魏斯氏菌WC018+植物乳杆菌LP067)魏斯氏菌WC018接种发酵、植物乳杆菌LP067接种发酵与混合接种发酵中亚硝酸盐含量分别为17.48、16.24、15.35 mg/kg,混合接种发酵亚硝酸盐含量比单一菌种接种发酵低5%~12%。XIANG等[31]
注:a表示自然发酵;b表示混合接种发酵;-表示文献中未说明
发酵开始前体系中原料及添加物会影响蔬菜发酵过程中亚硝酸盐的含量。DING等[14]测定了美国北卡罗纳州市场上46种不同原料泡菜的亚硝酸盐含量,发现其主要存在于腌制青豆(1 mg/kg)、腌制卷心菜(2 mg/kg)、腌制甜菜(6 mg/kg)和腌制蘑菇(2 mg/kg)4种酸化泡菜与希腊橄榄菜(3 mg/kg)和韩国大白菜(14 mg/kg)2种发酵泡菜中。黄润秋等[15]研究发现,嫩姜硝酸盐含量达2 250 mg/kg,莴笋和萝卜含量为1 110 mg/kg,将以上单原料制成泡菜,萝卜的“亚硝峰”出现在第1天(30 mg/kg),莴笋的“亚硝峰”出现在第2天(22 mg/kg),嫩姜泡菜在整个发酵过程中亚硝酸盐含量均低于20 mg/kg;相关性分析表明,亚硝酸盐的积累与原料中硝酸盐的含量呈正相关(r=0.82),而嫩姜中硝酸盐含量很高却未出现亚硝酸盐积累,究其原因可能与嫩姜中含有生姜精油、姜辣素等抑菌物质有关。泡菜使用的原料种类是导致亚硝酸盐含量差异的主要影响因素。不同蔬菜组合在自然发酵过程中 “亚硝峰”的变化范围为12~60 mg/kg,蔬菜组合越多,“亚硝峰”峰值越低,大白菜、豇豆、白萝卜、胡萝卜与黄瓜的组合“亚硝峰”峰值最低,仅为13 mg/kg[16]。
泡菜在发酵过程中容易产生亚硝酸盐,控制其发酵条件(发酵温度、pH值、发酵时间与食盐浓度等)可明显减缓亚硝酸盐的生成。乳酸菌的最适温度为30~40 ℃,最适pH为5.5~6.5,因此,发酵温度和pH都会影响乳酸菌降解亚硝酸盐的能力。WANG等[17]研究发现,在一定范围内提高发酵温度,有利于泡菜快速产酸并缩短成熟期,在发酵第1天,温度为25、35 ℃的实验组pH值下降至3.5左右,而温度为10、15 ℃的实验组到达相同pH则需要15~20 d。相较于自然发酵,在发酵第7天,-1 ℃条件下3种乳酸菌(清酒乳杆菌、弯曲乳杆菌、短乳杆菌)的亚硝盐降解率分别为87.9%、66.0%、57.1%,而15 ℃培养条件下3种乳酸菌的亚硝酸盐降解率均接近100%[18]。
除此之外,在发酵过程中,盐浓度对乳酸菌降解亚硝酸盐的能力也有很大影响。YANG等[19]将植物乳杆菌HBUAS 51041和肠系膜明串珠菌ORC 2以1∶1的比例接种至盐质量分数分别为0.5%、1.5%、2.5%、3.5%的大白菜中,发现“亚硝峰”均出现在第3天,其中盐质量分数为0.5%的泡菜中亚硝酸含量最高(2.0~2.5 mg/kg),其次是盐质量分数为3.5%的泡菜(1.0~1.5 mg/kg),这可能是由于盐质量分数为0.5%的泡菜中存在腐败菌,而盐质量分数为3.5% 的泡菜中乳酸菌的生长受到抑制;因此,当发酵期延长至第30天,盐质量分数为0.5%的泡菜中亚硝酸盐含量反而最低(0.29 mg/kg)。李军波[20]对3种盐质量分数(2%、5%、8%)发酵的泡菜进行研究发现,盐质量分数为2%的泡菜中乳酸菌繁殖代谢最快,亚硝酸盐含量降低最快,而盐质量分数为8%的泡菜中乳酸菌繁殖代谢最慢,亚硝酸盐含量降低最慢,泡菜成熟所需时间最长。
泡菜在自制或工业化生产中所用容器类型的不同对泡菜中亚硝酸盐含量的影响较大。LIU等[21]研究发现,在密封发酵第31天,塑料罐和陶瓷罐中发酵的四川泡菜亚硝酸盐含量较高,分别为2.50、2.35 mg/kg;而玻璃罐中四川泡菜的亚硝酸盐含量最低,仅为1.90 mg/kg。
泡菜生产过程中降低亚硝酸盐含量的方法一般可分为3类:物理降解法、化学降解法和生物降解法。图2展示了不同方法降低泡菜中亚硝酸盐含量的途径。
图2 降低泡菜中亚硝酸盐含量的方法途径
Fig.2 Methods for nitrite reduce in pickled vegetables
物理降解法主要是对泡菜原料进行前处理,包括低温冷藏、高温处理等,通过降低原料中硝酸盐含量、抑制亚硝酸盐产生菌的生长以及降低硝酸盐还原酶活性等方式,最终降低泡菜产品中的亚硝酸盐含量。
3.1.1 低温冷藏
低温冷藏能降低蔬菜中固有的硝酸还原酶活性,抑制亚硝酸盐的积累。尹丰等[32]通过对比12种蔬菜在低温冷藏和常温贮藏下亚硝酸盐含量的变化发现,低温贮藏可延迟“亚硝峰”的出现,但低温会破坏蔬菜细胞结构,使发酵后的泡菜风味和口感变差。徐斌等[33]检测了9种山野菜冷冻干燥后亚硝酸盐含量的变化发现,冻干后的山野菜中亚硝酸盐含量均远低于室温贮存的山野菜中亚硝酸盐含量。
3.1.2 高温处理
高温处理如漂烫处理既可抑制蔬菜中硝酸还原酶的活性,亦可杀死部分附着在蔬菜表面的硝酸还原菌,从而抑制发酵过程中亚硝酸盐的形成,亚硝酸盐含量随漂烫时间延长而逐渐降低[34]。MENARD等[34]研究发现漂烫处理可降低蔬菜中近75%的亚硝酸盐含量。
3.2.1 添加抗氧化剂
抗坏血酸(维生素C)、抗坏血酸钠和异抗坏血酸钠等抗氧化剂可将亚硝酸盐还原成NO,从而降低亚硝酸盐含量。在原料中加入0.5‰的维生素C能将香菇泡菜中亚硝酸盐含量从6.16 mg/kg降低至3.11 mg/kg[35]。在泡菜中加入维生素C可降低泡菜发酵过程中的“亚硝峰”峰值,发酵第9天时,维生素C组亚硝酸盐含量为5.47 mg/kg,而对照组达10.34 mg/kg[36]。
3.2.2 添加有机酸
有机酸(如乳酸、乙酸、草酸、柠檬酸等)中的H+可与结合生成HNO2,并分解为NO2和NO,从而降低亚硝酸盐含量。在泡菜发酵前期分别添加6种有机酸(草酸、乳酸、乙酸、酒石酸、柠檬酸与苹果酸)发现,所有有机酸均能显著降低泡菜中亚硝酸盐的含量,其中草酸降解能力最强,乙酸最弱[37]。在泡菜中分别添加1%的柠檬酸、苹果酸和乳酸,均能快速降低泡菜的pH值,从而显著降低泡菜中亚硝酸盐含量[38]。
3.2.3 添加发酵辅料
发酵辅料是指泡菜在发酵过程中为了提升风味而添加的调味料,部分发酵辅料具有一定的降低亚硝酸盐含量的能力,如大蒜、大葱、姜、糖以及花椒等。泡菜中添加天然香辛料辣椒、花椒、大蒜和生姜对有害菌的抑制效果依次为辣椒>大蒜>生姜>花椒,将4种香辛料以最优配比(辣椒0.36 g/L、大蒜0.8 g/L、花椒0.18 g/L、生姜0.6 g/L)投入泡菜中,发酵第7天时,亚硝酸盐含量降低了90%[39]。除可通过抑制有害菌的生长而减缓亚硝酸盐的生成外,大蒜中所含巯基化合物亦可与亚硝酸盐结合生成酯类化合物[40],从而降低泡菜中亚硝酸盐含量。
3.2.4 添加天然成分
一些天然成分因具有较强的还原能力,可与亚硝酸盐发生反应,从而达到降低亚硝酸盐含量的效果,将莲房原花青素提取物、玫瑰多酚、绿茶提取物等加入泡菜中还能丰富泡菜风味[41]。在泡菜中添加9%的蓝莓酒渣后,其亚硝酸盐含量比空白对照组低62.20%,可显著降低泡菜中亚硝酸盐与生物胺的含量[42]。而在700 g四川泡菜中加入60 g枸杞,不仅可增加泡菜的总酸含量和抗氧化能力,还可降低泡菜中亚硝酸盐含量并改善泡菜感官品质[43]。
3.3.1 亚硝酸盐还原酶降解法
亚硝酸盐还原酶能将亚硝酸盐还原为NO或是反硝化作用中的关键酶。将从短乳杆菌菌株中提取而来的亚硝酸盐还原酶进行冷冻干燥处理后,再将其加至人参、萝卜匀浆中30 ℃培养12 h,匀浆中亚硝酸盐含量显著下降[44]。
3.3.2 微生物降解法
发酵乳杆菌、植物乳杆菌、肠膜明串珠菌等乳酸菌均具有良好的亚硝酸盐清除作用。比较我国不同区域泡菜中的细菌组成发现,亚硝酸盐还原菌属包括乳酸菌(73.37%)、片球菌(0.93%)、不动杆菌(0.74%)、白串珠菌(0.31%)等,其中乳酸菌为优势菌属,与亚硝酸盐含量呈显著负相关[45]。XIA等[22]从自然发酵的泡菜中提取得到了对亚硝酸盐具有较高耐受性的乳酸菌菌株AR123,并将其重新应用于泡菜发酵中,相较于自然发酵,接种发酵泡菜的亚硝酸含量由17.92 mg/kg显著降低至0.83 mg/kg。
3.3.3 接种噬菌体降解法
近年来研究发现,噬菌体可控制食品中腐败菌和致病菌的生长,其同样可能对泡菜中亚硝酸盐的降解具有一定潜力。ZHENG等[46]研究表明,泡黄瓜中产生亚硝酸盐的优势菌群是嗜中温需氧细菌,在泡菜中同时接种嗜中温需氧细菌的特异性噬菌体和乳酸菌进行混合发酵,能在泡菜发酵前期降低亚硝酸盐含量。
泡菜虽可通过加入盐溶液发酵制作,但目前更多是使用卤水发酵进行制作。卤水发酵制作泡菜高度依赖原料中自身携带的乳酸菌,如肠系膜明串珠菌、植物乳杆菌、粪肠球菌等。陈坛卤水是指循环使用多次的泡菜卤水,重复使用的卤水具有启动发酵快、乳酸菌大量积累、减少有害微生物滋生等特点。泡菜中的营养物质(如碳水化合物、蛋白质和脂肪)能被乳酸菌转化为各种有机酸、氨基酸、醇、酯和酮等,从而形成泡菜的独特风味。CHEN等[47]研究发现,经过第4轮发酵,萝卜泡菜成熟时的微生物菌群、有机酸、游离氨基酸和挥发性成分含量等与卤水基本一致,并且还能将发酵时间从6 d减少至1~2 d,显著缩短发酵时间。但由于自然发酵生产的泡菜受环境因素(生产季节、操作卫生条件等)影响较大,导致产品质量稳定性差,为抑制杂菌生长并且获得安全优质的泡菜产品,接种发酵泡菜越来越受到关注。
接种发酵是将标准菌种接种于蔬菜上进行发酵的方式。20世纪60年代起,泡菜生产中开始应用接种发酵。一些具有优良特性的优势乳酸菌种类,如肠系膜明串珠菌,乳酸乳球菌、柠檬酸乳杆菌和植物乳杆菌等是可有效提高泡菜质量的发酵剂[48]。乳酸菌纯种发酵、乳酸菌与商业发酵剂混合接种发酵均可迅速降低泡菜中的pH值和亚硝酸盐含量;泡菜纯种发酵和混合接种发酵72 h后亚硝酸盐含量(1.00、0.88 mg/kg)显著低于自然发酵(17.92 mg/kg)[22],纯种发酵与混合接种发酵能更为有效的降低亚硝酸盐含量,增强泡菜的感官特性,同时缩短泡菜的发酵时间。XIANG等[31]研究表明,植物乳酸杆菌与魏斯氏菌混合接种发酵可使四川泡菜中亚硝酸还原酶的表达比自然发酵高2倍,使亚硝酸盐降解速度更快,并显著提升泡菜的风味。肠系膜明串珠菌、短乳杆菌与魏斯氏菌混合接种发酵的四川泡菜“亚硝峰”峰值比自然发酵更低,且由于产酸时间较早,泡菜中乳酸、甘露醇、鲜味与甜味氨基酸含量提高,总酸含量降低,泡菜的感官品质得到大幅提升[25]。接种从泡菜中分离得到的巨大芽孢杆菌L222能使泡菜中醇类物质含量维持在较高水平,促进酯类物质合成,抑制硫化物的生成以及致病菌的生长,从而提高泡菜发酵的整体质量[28]。将植物乳杆菌LV02与小扁豆乳酸杆菌LV73进行混合接种发酵,泡菜中嗜温微生物和乳酸菌总数比自然发酵更占优势,从而使泡菜稳定性大幅提高,发酵周期大大缩短,为泡菜的标准化生产提供了理论基础[29]。
由于接种发酵的工艺流程较为繁琐、操作要求较高,因此采用操作简便的直投式发酵剂发酵为蔬菜发酵研究提供了新的思路。直投式发酵剂是指将高浓度的发酵菌种冷冻干燥后,制成方便运输贮藏、无需活化等预处理、可直接加入原料中进行发酵的发酵剂。将直投式发酵剂用于发酵蔬菜的生产,可节省人力、空间、资源和时间,不仅可使生产专业化、规范化和统一化,还可提高产品质量,保障消费者健康。利用直投式乳酸菌冻干粉对青菜进行发酵,当接种量为0.05%、盐质量分数为6%,发酵温度为33.9 ℃、加糖量为1.74%、发酵时间为91.5 h时,泡菜中亚硝酸盐含量最低(2.54 mg/kg),且相较于自然发酵其泡菜口感更好[49];在草菇发酵中投入植物乳杆菌dy-1直投式发酵剂,同时以草菇的脆度与色差进行发酵工艺优化,研究发现,当添加柠檬酸2 g/L、CaCl2 6 g/L、盐10 g/L、烫漂时间为9 min时,泡菜发酵品质最佳,相较于自然发酵,其亚硝酸盐含量下降更显著,发酵时间更短,感官品质更高[50]。
利用乳酸菌降解泡菜中的亚硝酸盐具有安全、高效等特点。但目前利用乳酸菌降解亚硝酸盐的研究尚处于初级阶段,主要还是集中在对产酸、产酶或产乳酸菌素的乳酸菌菌株进行筛选与纯化,然后将其应用于蔬菜发酵过程中,而对乳酸菌菌种改良并进行安全性评价的相关研究不多,对乳酸菌降解亚硝酸盐的分子机制知之甚少。采用乳酸菌接种发酵可有效降低泡菜中亚硝酸盐含量并大幅缩短泡菜发酵周期,但当前大部分尚处于实验室研究阶段,鲜有工业化的实际应用,因此,还需进一步完善接种发酵的质量与安全管理体系,从而为工业化生产安全、营养、美味的泡菜提供解决方案。
[1] XIONG T, GUAN Q Q, SONG S H, et al.Dynamic changes of lactic acid bacteria flora during Chinese sauerkraut fermentation[J].Food Control, 2012, 26(1):178-181.
[2] XIAO Y S, XIONG T, PENG Z, et al.Correlation between microbiota and flavours in fermentation of Chinese Sichuan paocai[J].Food Research International, 2018, 114:123-132.
[3] CHANG A C, YANG T Y, RISKOWSKI G L.Changes in nitrate and nitrite concentrations over 24 h for sweet basil and scallions[J].Food Chemistry, 2013, 136:955-960.
[4] 迟雪梅, 王一茜, 乔慧, 等.发酵蔬菜硝酸盐、亚硝酸盐消长变化及其相关性的研究[J].食品与发酵工业, 2018, 44(1):25-30.
CHI X M, WANG Y Q, QIAO H, et al.Study on the growth and decline of nitrate and nitrite in fermented vegetables and their correlation[J].Food and Fermentation Industries, 2018, 44(1):25-30.
[5] LEE S H, JUNG J J, LEE S H.Complete genome sequence of Weissella koreensis KACC 15510, isolated from kimchi[J].Journal of Bacteriology, 2011, 193(19):5 534-5 534.
[6] 张庆芳, 迟乃玉, 郑燕, 等.乳酸菌降解亚硝酸盐机理的研究[J].食品与发酵工业, 2002, 28(8):27-31.
ZHANG Q F, CHI N Y, ZHENG Y, et al.The study on mechanism of nitrite degradation by lactic acid bacteria[J].Journal of Food and Fermentation Industries, 2002,28(8):27-31.
[7] LIU W LI, ZHANG L W, SHI J, et al.Assessment of the safety and applications of bacteriocinogenic Enterococcus faecium Y31 as an adjunct culture in North-eastern Chinese traditional fermentation paocai[J].Food Control, 2015, 50(4):637-644.
[8] TOMITA S, NAKAMURAB T, OKADA S.NMR-and GC/MS-based metabolomic characterization of sunki, an unsalted fermented pickle of turnip leaves[J].Food Chemistry, 2018, 258:25-34.
[9] CAO J L, YANG J X, HOU Q C, et al.Assessment of bacterial profiles in aged, home-made Sichuan paocai brine with varying titratable acidity by PacBio SMRT sequencing technology[J].Food Control, 2017, 78:14-23.
[10] LIU D M, WANG P, ZHANG X Y, et al.Characterization of nitrite degradation by Lactobacillus casei subsp.rhamnosus LCR 6013[J].PloS One, 2014, 9(4):1-7.
[11] 王一茜, 荣金诚, 王晓辉, 等.常见乳酸菌降解亚硝酸盐机理探讨[J].食品与发酵工业, 2019, 45(8):54-60.
WANG Y Q, RONG J C, WANG X H, et al.Discussion on the mechanism of nitrite degradation by common lactic acid bacteria[J].Food and Fermentation Industries, 2019, 45(8):54-60.
[12] 王盼, 费永涛, 刘冬梅, 等.植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化[J].现代食品科技, 2015(6):150-155.
WANG P, FEI Y T, LIU D M, et al.Gene cloning, expression and purification of nitrite reductase in Lactobacillus plantarum DMDL 9010[J].Modern Food Science and Technology, 2015(6):150-155.
[13] FANG F, FENG T T, DU G C, et al.Evaluation of the impact on food safety of a Lactobacillus coryniformis strain from pickled vegetables with degradation activity against nitrite and other undesirable compounds[J].Food Additives & Contaminants, 2016, 33(4):623-630.
[14] DING Z S, JOHANNINGSMEIER S D, PRICE R, et al.Evaluation of nitrate and nitrite contents in pickled fruit and vegetable products[J].Food Control, 2018, 90:304-311;271.
[15] 黄润秋, 陈功, 贺云川, 等.原料和工艺对泡菜亚硝酸盐含量的影响[J].食品与发酵科技, 2020, 56(4):1-5;49.
HUANG R Q, CHEN G, HE Y C.The effect of raw materials and technology on the nitrite content of kimchi[J].Food and Fermentation Technology, 2020, 56(4):1-5;49.
[16] 闫亚梅, 吕嘉枥, 彭松, 等.不同蔬菜组合发酵泡菜中亚硝酸盐含量的动态分析[J].食品工业, 2015, 36(12):99-104.
YAN Y M, LYU J L, PENG S, et al.Dynamic analysis of nitrite contents in different vegetables combination fermented-pickles[J].The Food Industry, 2015, 36(12):99-104.
[17] WANG D D, CHEN G, TANG Y, et al.Effects of temperature on paocai bacterial succession revealed by culture-dependent and culture-independent methods[J].International Journal of Food Microbiology, 2020, 317:108463.
[18] KIM S H, KANG K H, KIM S H, et al.Lactic acid bacteria directly degrade N-nitrosodimethylamine and increase the nitrite-scavenging ability in kimchi[J].Food Control, 2017, 71:101-109.
[19] YANG X Z, HU W Z, JIANG A L, et al.Effect of salt concentration on quality of Chinese northeast sauerkraut fermented by Leuconostoc mesenteroides and Lactobacillus plantarum[J].Food Bioscience, 2019, 30:100421.
[20] 李军波. 盐浓度对传统泡菜和强化发酵泡菜的影响[D].南昌大学, 2016.
LI J B.Effect of salt concentration on traditional kimchi and enhanced fermented kimchi[D].Nanchang:Nanchang university, 2016.
[21] LIU L, SHE X, QIAO Y, et al.Effect of different fermenting containers on the deterioration of Sichuan pickle[J].LWT, 2019, 111:829-836.
[22] XIA Y J, LIU X F, WANG G Q, et al.Characterization and selection of Lactobacillus brevis starter for nitrite degradation of Chinese pickle[J].Food Control, 2017, 78(1):126-131.
[23] XIONG T, CHEN J K, HUANG T, et al.Fast evaluation by quantitative PCR of microbial diversity and safety of Chinese paocai inoculated with Lactobacillus plantarum NCU116 as the culture starter[J].LWT, 2019, 101:201-206.
[24] HE Z, CHEN H Y, WANG X Y, et al.Effects of different temperatures on bacterial diversity and volatile flavor compounds during the fermentation of suancai, a traditional fermented vegetable food from northeastern China[J].LWT, 2020, 118:108773.
[25] LUO Y L, LIU Y L, REN T, et al.Sichuan paocai fermented by mixed:Tarter culture of lactic acid bacteria[J].Food Science & Nutrition, 2020, 8(5):402-409.
[26] RAO Y, TAO Y F, CHEN X, et al.The characteristics and correlation of the microbial communities and flavors in traditionally pickled radishes[J].LWT, 2020, 118:108804.
[27] LIU L, SHE X, CHEN X, et al.Microbiota succession and chemical composition involved in the radish fermentation process in different containers[J].Frontiers in Microbiology, 2020, 11:445.
[28] LUO F P, YANG Z Y, ZHONG K, et al.Effects of Bacillus megaterium L222 on quality and bacterial diversity of Sichuan paocai[J].Food Research International, 2020, 140(15):109994.
[29] CHEN Z D, KANG J Y, ZHANG Y, et al.Differences in the bacterial profiles and physicochemical between natural and inoculated fermentation of vegetables from Shanxi Province[J].Annals of Microbiology, 2020, 70(1).DOI:10.1186/S13213-020-01605-5.
[30] SONG Q Z, ZHAO F K, WANG B B, et al.Metagenomic insights into Chinese northeast suancai:Predominance and diversity of genes associated with nitrogen metabolism in traditional household suancai fermentation[J].Food Research International, 2021, 139:109924.
[31] XIANG W L, ZHANG N D, LU Y, et al.Effect of Weissella cibaria co-inoculation on the quality of Sichuan pickle fermented by Lactobacillus plantarum[J].LWT, 2020, 121:108975.
[32] 尹丰, 邵素琴, 谢银燕, 等.家常菜和蔬菜中亚硝酸盐含量的变化[J].中国食物与营养, 2016, 22(3):19-23.
YI F, SHAO S Q, XIE Y Y, et al.Changes in nitrite content in home-cooked dishes and vegetables[J].China Food and Nutrition, 2016, 22(3):19-23.
[33] 徐斌, 彭国良, 王丹.冷冻干燥山野菜中矿物质元素及亚硝酸盐含量的测定[J].吉林医药学院学报, 2016, 37(06):437-438.
XU B, PENG G L, WANG D.Freeze-dried wild herb and mineral element in the determination of nitrite content[J].Journal of Jilin Institute of Medicine, 2016, 37(6):437-438.
[34] MENARD C, HERAUD F, VOLATIER J L, et al.Assessment of dietary exposure of nitrate and nitrite in France[J].Food Additives & Contaminants, 2008, 25(8):971-988.
[35] 夏季, 方勇, 王梦梦, 等.不同发酵处理对香菇泡菜质构及风味物质的影响[J].食品科学, 2019, 40(20):171-177.
XIA J, FANG Y, WANG M M, et al.Effects of different fermentation treatments on the texture and flavor substances of mushroom kimchi[J].Food Science, 2019, 40(20):171-177.
[36] 王晓婧. 多酚提取物与维生素C对泡菜发酵的影响[J].中国调味品, 2019(10):105-107;111.
WANG X J.The effect of polyphenol extract and vitamin C on kimchi fermentation[J].China Seasoning, 2019(10):105-107;111.
[37] 商景天, 王修俊, 王继辉.有机酸对泡菜中亚硝酸盐的降解作用[J].食品与机械, 2018, 197(3):78-83.
SHANG J T, WANG X J, WANG J H.The degradation of nitrite in kimchi by organic acids[J].Food and Machinery, 2018, 197(3):78-83.
[38] 肖付才, 刘凯, 陈凤仪, 等.有机酸对泡菜亚硝酸盐和生物胺的抑制作用[J].中国调味品, 2020, 45(10):80-84.
XIAO F C, LIU K, CHEN F Y, et al.Organic acid of pickle nitrite and biogenic amine [J].Chinese Seasoning, 2020, 45(10):80-84.
[39] 张婷, 李晓, 许航, 等.天然复合香辛料对低盐四川泡菜内微生物菌系的影响研究[J].中国调味品, 2018, 43(8):22-26.
ZHANG T, LI X, XU H, et al.The effect of natural compound spices on the microbial flora in low-salt Sichuan kimchi[J].China Seasoning, 2018, 43(8):22-26.
[40] HUANG T T, WU Z Y, ZHANG W X.Effects of garlic addition on bacterial communities and the conversions of nitrate and nitrite in a simulated pickle fermentation system[J].Food Control, 2020, 113:107215.
[41] ZHANG Q Q, JIANG M, RUI X, et al.Effect of rose polyphenols on oxidation, biogenic amines and microbial diversity in naturally dry fermented sausages[J].Food Control, 2017, 78:324-330.
[42] 张娜威, 陈凤仪, 李二虎.蓝莓酒渣对泡菜亚硝酸盐和生物胺的抑制作用[J].食品科学, 2020, 41(17):1-8.
ZHANG N W, CHEN F Y, LI E H.Inhibition of blueberry wine residue on nitrite and biogenic amines in kimchi[J].Food Science, 2020, 41(17):1-8.
[43] LIAO M, WU Z Y, YU G H, et al.Improving the quality of Sichuan pickle by adding a traditional Chinese medicinal herb Lycium barbarum in its fermentation[J].International Journal of Food Science and Technology, 2017, 52(4):936-943.
[44] 吕玉涛. 产亚硝酸盐还原酶短乳杆菌发酵条件优化及酶的分离纯化研究[D].上海:上海师范大学,2010.
LYU Y T.Optimization of fermentation conditions for nitrite reductase-producing Lactobacillus brevis and study on the separation and purification of enzyme[D].Shanghai:Shanghai Normal University, 2010.
[45] WANG Z X, SHAO Y Y.Effects of microbial diversity on nitrite concentration in paocai, a naturally fermented cabbage product from China[J].Food Microbiol, 2018, 72:185-192.
[46] ZHENG X F, YANG Z Q, ZHANG H, et al.Isolation of virulent phages infecting dominant mesophilic aerobic bacteria in cucumber pickle fermentation[J].Food Microbiology, 2020, 86:103330.
[47] CHEN A J, LUO W, PENG Y T, et al.Quality and microbial flora changes of radish paocai during multiple fermentation rounds[J].Food Control, 2019, 106:106733.
[48] MOON S H, KIM C R, CHANG H C.Heterofermentative lactic acid bacteria as a starter culture to control kimchi fermentation[J].LWT-Food Science and Technology, 2018, 88:181-188.
[49] 李洁芝,陈功, 张其圣, 等.直投式乳酸菌发酵青菜时亚硝酸盐的动态变化与控制[J].食品与发酵工业, 2009, 35(8):64-68.
LI J Z, CHEN G, ZHANG Q S, et al.The dynamic changes and control of nitrite during the fermentation of green vegetables by direct injection lactic acid bacteria[J].Food and Fermentation Industries, 2009, 35(8):64-68.
[50] 王强, 孙鑫娟, 程珂, 等.植物乳杆菌dy-1发酵草菇泡菜工艺研究[J].食品与发酵工业, 2018, 44(7):158-164.
WANG Q, SUN X J, CHENG K, et al.Study on the process of pickled volvariella volaceas fermented by Lactobacillus plantarum dy-1[J].Food and Fermentation Industries, 2018, 44(7):158-164.