协同发酵生产的鲜湿米粉及其品质特性和风味研究

任元元*,李宇航,孟资宽,张鑫,邹育,王拥军

(四川省食品发酵工业研究设计院有限公司,四川 成都,611130)

摘 要 为探究不同微生物组合协同发酵对鲜湿米粉品质和风味的影响,将筛选的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae.23,S.c.23)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei.17,L.c.17)与植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum.9,L.p.9)协同发酵,并测定产酸能力、植物乳杆菌活菌数、理化性质、蒸煮特性、质构特性、挥发性风味物质。结果表明,协同发酵生产的发酵米粉品质良好,挥发性风味物质显著增加。L.p.9+S.c.23+L.c.17的产酸能力最强,植物乳杆菌活菌数最高达到(9.06±0.15) lg CFU/g;蛋白质、脂肪含量显著降低,直链淀粉含量显著升高。结合蒸煮和质构特性测定,L.p.9+S.c.23+L.c.17制得的米粉蒸煮损失率、硬度、弹性等方面优于其他发酵组。L.p.9+S.c.23+L.c.17发酵米粉的挥发性风味物质高达37种,主要为酯类和醇类。多菌种协同发酵显著提升了鲜湿米粉的品质,增加了风味,在发酵米粉产业开发中具有良好的应用潜力。

关键词 协同发酵;鲜湿米粉;植物乳杆菌;酿酒酵母;干酪乳杆菌;品质特性;风味

鲜湿米粉是我国的一种传统食物,距今已有几千年的历史[1]。现在生产米粉的作坊和小厂多为自然发酵,经过自然发酵的米粉,比未发酵过的米粉食用品质更佳[2]。但自然发酵时间较长,一般为2~3 d,容易被环境影响而导致杂菌污染,不能控制产品质量的稳定性[3]。微生物强化发酵成为目前受欢迎的发酵方式,马霞等[4]从大米发酵液中分离鉴定出乳酸乳球菌,利用其发酵米粉后品质明显提高;李芸等[5]采用从米粉中分离的4株优势菌混合发酵,米粉品质最接近于自然发酵。微生物强化发酵可加快发酵速度,提高发酵产品的质量和安全性[6]

米粉发酵液中起主要作用的是乳酸菌[7]。杨有望[8]通过对大米自然发酵液高通量测序发现,各个阶段乳酸菌的含量占整个细菌含量的90%以上,植物乳杆菌属是鲜湿米粉自然发酵的优势菌。樊振南等[9]利用3种不同的植物乳杆菌分别强化发酵,发现鲜湿米粉的品质都有一定程度地提升,风味也呈现出各自的优势特征。目前,关于不同种类乳酸菌、乳酸菌协同酵母菌发酵鲜湿米粉的研究较少,有学者以植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和酿酒酵母3种微生物纯种发酵米粉,研究了其对食用品质的影响[10],而植物乳杆菌、酿酒酵母和干酪乳杆菌协同发酵对鲜湿米粉风味的研究未见报道。本研究利用这3种菌协同发酵鲜湿米粉,并测定产酸能力、植物乳杆菌活菌数、理化性质、蒸煮特性、质构特性、挥发性风味物质,研究协同发酵对鲜湿米粉品质特性和风味的影响,对进一步促进多种微生物在鲜湿米粉产业的应用具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 实验材料

早籼米,广汉市鑫发农副产品有限公司;植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum.9,L.p.9),酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae.23,S.c.23),干酪乳杆菌(Lactobacillus casei.17,L.c.17),由本实验室分离筛选于自然米粉发酵液;其余试剂均为分析纯,成都市科龙化学品有限公司。

1.1.2 实验仪器

超净台,苏州安泰空气技术有限公司;DM-140型磨粉磨浆机,上海双亿机电有限公司;SZ-30型米粉机,广州旭众有限公司;TA-XT型质构仪,上海腾拔科技有限公司;7890A-5975C气相色谱质谱联用仪,安捷伦科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 鲜湿米粉的制备

参照席慧婷等[11]的方法,鲜湿米粉的制备工艺:原料→清洗→磨浆→发酵→糊化挤压→冷冻老化→水洗→包装。工艺要点:称取10 kg大米,清洗米粒3遍,加入8 kg蒸馏水后打浆。分别称取3 kg的米浆,放在紫外灯下灭菌,发酵过程共分为4组,分别接入L.p.9;L.p.9+S.c.23;L.p.9+L.c.17;L.p.9+S.c.23和L.c.17。各实验组菌液初始浓度用磷酸盐缓冲液稀释到1×109 CFU/mL。对照为自然发酵组,将各实验组于37 ℃恒温培养箱发酵12 h。

1.2.2 产酸能力的测定和微生物计数

取各组样品中发酵米浆的溶液,每3 h取1次,用pH计测量。在3、6、9、12 h分别取发酵米浆样品,采用稀释法,使用乳酸菌MRS培养基培养,于37 ℃培养48~72 h后计数。

1.2.3 理化性质的测定

直链淀粉含量参照GB/T 15683—2008《大米直链淀粉含量的测定》;蛋白质含量参照GB/T 5009.5—2016《食品中蛋白质的测定》;脂肪含量参照GB/T 5009.6—2016《食品中脂肪的测定》。

1.2.4 蒸煮特性测定

参照文献[12]的方法:取发酵12 h的10 g左右鲜湿米粉(m0),加入300 mL沸水煮3 min,沥干5 min,称质量得m1。蒸煮液于105 ℃下干燥至恒重,称量得水中固形物m2。蒸煮损失率和复水率的计算如公式(1)(2)所示:

蒸煮损失率

(1)

复水率

(2)

1.2.5 质构特性测定

取发酵12 h的鲜湿米粉测量。质构仪参数[13]:测定模式TPA;测定探头,TA 3/100;下行速度1 mm/s;测定速度0.5 mm/s;上行速度1 mm/s;测试距离20 mm;应变位移50%;引发力5 g;引发类型,自动;获取数率200 PPS。质构TPA指标包括硬度、弹性、咀嚼性、回复性和黏聚性。

1.2.6 挥发性成分测定

参照文献[11]的方法。

1.2.7 数据处理

每组实验重复3次,使用SPSS 25.0和Origin 2018软件进行统计学分析和作图。

2 结果与分析

2.1 发酵过程中pH的变化

乳酸菌作为米粉发酵过程中的主要微生物,能利用碳水化合物产生大量乳酸,降低发酵液的pH并抑制有害微生物的生长[14]。如图1所示,不同发酵方式产酸能力差异显著(P<0.05)。随着发酵时间的增加,pH不断降低,发酵开始到9 h pH下降最明显,在12 h时除了自然发酵组外,各组的pH均在4.5以下,其中L.p.9+S.c.23+L.c.17产酸能力最强,达到(4.02±0.10)。3个协同发酵组pH下降趋势和L.p.9的趋势一致,并且协同发酵组的pH值要低于L.p.9,说明植物乳杆菌在发酵初期就成为主导优势菌,并且在不同菌种协同作用下酸度更低。酸度下降最慢的是自然发酵组,是因为环境中的多种微生物相互竞争和作用,包括霉菌等参与发酵,这与李芸等[5]的研究结果相似。

图1 发酵过程pH的变化
Fig.1 Change of pH during fermentation

2.2 发酵过程中植物乳杆菌活菌数的变化

如图2所示,随着发酵时间的增加,植物乳杆菌活菌数呈现增长的趋势。在发酵3 h,植物乳杆菌活菌数快速增长,在9 h增长速度趋于平缓,此时L.p.9+S.c.23+L.c.17组植物乳杆菌活菌数最高,为(9.06±0.15) lg CFU/g,自然发酵组植物乳杆菌的活菌数最低。单一植物乳杆菌发酵组的活菌数低于3组协同发酵组,说明协同发酵能够促进乳酸菌的生长,这是因为植物乳杆菌蛋白水解系统不完全,对大米中蛋白质含量减少作用不明显,而干酪乳杆菌蛋白酶活力强,能分解蛋白质产生多肽和氨基酸为植物乳杆菌提

图2 植物乳杆菌活菌数的变化
Fig.2 Changes of viable number of L.plantarum

供氮源,促进其生长[15];酵母菌也能分解蛋白质产生氨基酸和维生素为植物乳杆菌提供营养,乳酸菌产酸为酵母菌生长提供良好的酸性环境,相互促进的共生关系使得植物乳杆菌作用更强[16]。协同发酵明显促进了植物乳杆菌在发酵液中的生长,活菌数显著高于单一植物乳杆菌发酵。

2.3 协同发酵对直链淀粉的影响

如图3所示,经过发酵各组大米直链淀粉含量均有所增长,其中L.p.9+S.c.23+L.c.17组直链淀粉增加了24.3%,增长比例最大,自然发酵组增长比例最小。L.p.9+S.c.23组和S.c.23+L.c.17组直链淀粉含量增加差异不显著(P>0.05)。单一植物乳杆菌发酵组直链淀粉增长的相对比例均小于协同发酵组。淀粉的非结晶区主要是由直链淀粉构成,发酵中微生物产生的酸和酶会水解支链淀粉,降解淀粉颗粒,提高结晶度,增加非结晶区的比例,所以发酵后的大米直链淀粉含量增加,并且协同发酵优势微生物越多,产生的酸和酶也越多,支链淀粉水解作用更强,直链淀粉含量增加越明显[17]

图3 直链淀粉含量的变化
Fig.3 Change of amylose content

2.4 协同发酵对蛋白质的影响

如图4所示,发酵显著降低了大米中蛋白质的含量。自然发酵组的蛋白质含量下降最少,由8.05%下降到6.49%。3个协同发酵组蛋白质含量下降比例显著高于单一植物乳杆菌组,其中L.p.9+S.c.23+L.c.17组由8.05%下降到5.09%,下降相对比例最高为36.77%。L.p.9+S.c.23组蛋白质降低的比例低于L.p.9+L.c.17组,可能是酵母菌的蛋白酶活力较弱,分解蛋白质能力不强,主要起分解作用的是乳酸菌产酸的蛋白酶[18]。虽然从营养方面,协同发酵降低了一定的蛋白质含量,但是却起到了纯化淀粉,增强淀粉凝胶能力的作用,此外,蛋白质分解而成的游离氨基酸也参与风味物质的形成[19]

图4 蛋白质含量的变化
Fig.4 Changes of protein content

2.5 协同发酵对脂肪的影响

如图5所示,发酵显著降低了大米中脂肪的含量。植物乳杆菌L.p.9组脂肪含量下降比例最少,从1.3%到0.74%。协同发酵组与自然发酵组脂肪下降幅度均高于L.p.9组,其中,L.p.9+S.c.23+L.c.17组脂肪下降到最低,为0.52%。自然发酵组消耗脂肪的能力要强于L.p.9+S.c.23组和L.p.9+L.c.17组,原因是自然发酵存在多种微生物,而霉菌和细菌有较强产脂肪酸的能力,所以自然发酵分解脂肪效率更高[10]。L.p.9+L.c.17组消耗脂肪的能力强于L.p.9+S.c.23组,这可能是因为干酪乳杆菌作为肠道益生菌,具有高效分解脂肪的能力[20]。协同发酵有利于脂肪的降解,也利于风味物质的形成[21]

图5 脂肪含量的变化
Fig.5 Change of fat content

2.6 协同发酵对米粉蒸煮特性的影响

如表1所示,自然发酵组的米粉蒸煮损失率显著高于L.p.9(P<0.05),复水率显著低于L.p.9(P<0.05)。L.p.9组的米粉蒸煮损失率显著高于3个协同发酵组(P<0.05),复水率显著低于3个协同发酵组(P<0.05)。经过多种微生物协同发酵的米粉更耐煮,不浑汤,这可能是发酵改变了米粉颗粒和淀粉结构,米粉颗粒减小更易糊化,复水力增加,淀粉结构中支链淀粉含量下降,形成结构更稳定的凝胶结构,蒸煮损失率降低[22]

表1 发酵对米粉蒸煮特性的影响
Table 1 Effect of fermentation on cooking characteristics of rice noodles

组别蒸煮损失率/%复水率/%L.p.94.54±0.54d105.10±1.33bL.p.9+S.c.233.76±0.23c110.42±2.57cL.p.9+L.c.173.43±0.72b113.27±2.08cdL.p.9+S.c.23+L.c.172.85±0.42a119.95±3.31e自然发酵组6.18±0.45e98.84±1.86a

注:不同小写字母表示同列差异显著(P<0.05)(下同)

2.7 协同发酵对米粉质构的影响

如表2所示,除L.p.9+S.c.23和L.p.9+L.c.17组黏弹性差异不显著外,米粉各质构指标变化差异显著(P<0.05)。L.p.9组在5种质构特性指标上均优于自然发酵组,说明植物乳杆菌发酵改善了米粉的品质,这与周显青等[23]的结论一致。L.p.9+S.c.23+L.c.17组质构特性品质最高,说明多种微生物协同作用提高了米粉的硬度和弹性,改善了黏聚性、咀嚼性和回复性。L.p.9+L.c.17组干酪乳杆菌协同发酵在硬度、咀嚼性和回复性上均高于L.p.9+S.c.23组。这可能是乳酸菌发酵产生的酸,乳酸菌和酵母菌产生的酶直接作用于淀粉分子结构,使直链淀粉分子断链及脱支,减弱其再结晶能力,保持凝胶水分,发酵也增强了直链淀粉的聚合度,形成较强的凝胶网络结构,这些变化有利于米粉糊化和老化,增强米粉的质构特性[24]

表2 发酵对米粉质构的影响
Table 2 Effect of fermentation on texture of rice noodles

组别硬度/g弹性黏聚性咀嚼性/MJ回复性L.p.9694.05±23.15b0.81±0.09b0.68±0.03b308.82±13.54b0.41±0.02bL.p.9+S.c.23736.65±9.64c0.91±0.07c0.75±0.02c379.51±21.47c0.48±0.03cL.p.9+L.c.17773.21±15.78d0.92±0.05c0.77±0.07c410.88±16.76d0.52±0.05dL.p.9+S.c.23+L.c.17847.43±11.61e0.97±0.10d0.87±0.04e536.05±26.43e0.63±0.01e自然发酵组643.92±21.42a0.74±0.13a0.61±0.06a247.36±15.19a0.37±0.02a

2.8 协同发酵对米粉风味的影响

由表3可知,L.p.9组检测出的香气成分有25种,其中以己醛和十一醛为代表的醛类化合物含量最多,占37.13%;以丙二酸和乙酸为代表的酸类化合物其次,占21.63%。L.p.9+S.c.23组检测出的香气成分有31种,其中以乙酸乙酯和己酸乙酯为代表的酯类化合物含量最多,占31.42%;以苯乙醇为代表的醇类化合物其次,占31.21%。L.p.9+L.c.17组检测出的香气成分有28种,其中以己醛和壬醛为代表的醛类化合物含量最多,占38.7%;以丙酸和丙二酸为代表的酸类化合物其次,占25.43%。L.p.9+S.c.23+L.c.17组检测出的香气成分有38种,其中以乙酸乙酯和乳酸丁酯为代表的酯类化合物含量最多,占46.17%,以癸醇和苯乙醇为代表的醇类化合物其次,占25.46%。自然发酵组检测出的香气成分有29种,其中以丁酸辛酯和丁酸丁酯为代表的酯类化合物含量最多,占34%;以1-壬烯-3-醇和苯乙醇为代表的醇类化合物其次,占27.64%。

表3 协同发酵的米粉香气成分分析结果
Table 3 Analysis results of aroma components of rice noodles by co-fermentation

编号化合物名称相对百分含量/%L.p.9L.p.9+S.c.23L.p.9+L.c.17L.p.9+S.c.23+L.c.17自然发酵组醇类A1 正丙醇----2.44±0.04A2 2-丁醇----2.93±0.04A3 异丁醇-1.77±0.02-2.01±0.05-A4 异戊醇2.12±0.022.69±0.052.29±0.032.15±0.024.39±0.07A5 正己醇----2.18±0.01A6 己醇---0.63±0.03-A7 1-壬烯-3-醇----4.75±0.04A8 庚醇---0.34±0.01-A9 桉树醇0.87±0.04-0.64±0.06--A10 氧化芳樟醇--0.56±0.050.55±0.03-A11 芳樟醇-1.66±0.052.70±0.080.81±0.02-A12 苯乙醇5.31±0.0721.43±0.428.76±0.1814.84±0.1710.95±0.23A13 月桂醇-1.86±0.05---A14 癸醇2.35±0.02--4.13±0.09-A15 正丙醇-1.80±0.04---A16 3,4-二羟基苯基二醇2.43±0.11-2.13±0.07--

续表3

编号化合物名称相对百分含量/%L.p.9L.p.9+S.c.23L.p.9+L.c.17L.p.9+S.c.23+L.c.17自然发酵组醛类B1 乙醛2.65±0.040.95±0.024.34±0.100.45±0.030.30±0.02B2 异戊醛-1.52 ±0.04-2.14±0.08-B3 己醛24.86±0.6311.73±0.3416.12±0.158.42±0.192.65±0.07B4 肉桂醛----0.48±0.04B5 月桂醛----0.92±0.03B6 苯甲醛1.19±0.050.84±0.032.73±0.080.75±0.02-B7 十一醛8.43±0.122.46±0.055.76±0.091.58±0.04-B8 壬醛--9.75±0.141.40±0.0511.74±0.08酸类C1 丙酸--7.89±0.25-1.75±0.02C2 2-氨基-6-甲基苯甲酸---2.66±0.05-C3 延胡索酸--2.51±0.04--C4 反式肉桂酸----0.71±0.03C5 氨基甲酸-0.84±0.02---C6 丙二酸10.24±0.211.17±0.037.96±0.242.05±0.07-C7 乙酸8.61±0.091.57±0.046.14±0.130.72±0.046.15±0.08C8 邻苯二甲酸2.78±0.27-0.93±0.05--C9 棕榈酸-0.87±0.04---C10 二苯乙酸-0.64±0.03---酮类D1 丁二酮0.36±0.010.55±0.021.98±0.060.56±0.03-D2 2-辛酮0.47±0.03----D3 6-十二酮----0.54±0.04D4 环己烷-1,3-二酮0.86±0.02----酯类E1 乙酸乙酯-14.46±0.35-23.62±0.565.76±0.17E2 乳酸丁酯---5.49±0.13-E3 甲酸苯乙酯-1.27±0.04---E4 苯甲酸苯乙酯2.73±0.08-0.86±0.02--E5 己酸乙酯-4.19±0.11-3.85±0.06-E6 乙酸异龙脑酯---0.26±0.02-E7 3-羟基丁酸乙酯---0.65±0.03-E8 甲酸辛酯---0.81±0.03-E9 庚酸乙酯---0.91±0.05-E10 邻氨基苯甲酸甲酯----0.74±0.02E11 桂酸桂酯---0.77±0.04-E12 乙酸苏合香酯----0.69±0.05E13 辛酸乙酯-2.53±0.07-1.47±0.05-E14 壬酸乙酯---1.86±0.043.41±0.14E15 丁酸辛酯---1.14±0.026.73±0.21E16 丙烯酸乙酯0.85±0.06-1.56±0.11--E17 乙酸壬酯1.37±0.043.89±0.252.68±0.12--E18 癸酸乙酯-2.96±0.16-2.43±0.09-E19 苯乙酸甲酯---0.78±0.04-E20 己酸香叶酯----0.99±0.04E21 丁酸丁酯----14.36±0.33E22 丁酰乳酸丁酯---0.41±0.02-E23 肉豆蔻酸乙酯-1.32±0.06-0.41±0.03-E24 异丁酸苯氧乙酯--0.72±0.03--E25 邻硝基苯乙酸甲酯--0.95±0.06--E26 己二酸二辛酯0.93±0.06----E27 棕榈酸乙酯-0.80±0.04-1.31±0.051.32±0.02烃类F1 丙烷-0.53±0.03-0.43±0.05-F2 1,3-环戊二烯--0.22±0.02--F3 柠檬烯3.52±0.072.56±0.092.18±0.132.11±0.061.83±0.05F4 正十七烷1.69±0.08----F5 正二十烷--0.42±0.03--F6 十四烷--0.89±0.04-3.78±0.15F7 二十烷----1.72±0.08F8 十三烷0.80±0.070.70±0.04--0.60±0.05F9 十六烷1.40±0.081.06±0.02-0.41±0.03-F10 正十五烷3.13±0.112.07±0.081.19±0.060.31±0.021.87±0.06F11 正十六烷2.34±0.161.83±0.070.72±0.05-2.24±0.05

发酵米粉的挥发性成分包括醛、醇、酸、酯、烃类化合物,自然发酵的米粉中香气成分以酯类和醇类为主。醛类和酸类物质也是乳酸菌发酵米粉中主要挥发性气味。酯类物质是酵母菌和乳酸菌协同发酵米粉中的主要挥发性气味。醇类物质在酵母菌的协同作用下也变成了主要香气成分,检测出的苯乙醇在酵母菌和植物乳杆菌协同发酵时含量最高。酵母菌的加入使得米粉在风味物质上生成更多酯类、醇类香气物质,可能是酵母发酵主要产物是酒精和CO2,还有其他醇类,酒精与乳酸菌发酵产生的有机酸生成酯,对米粉的香气有着重要的贡献[25]。乳酸菌主要影响鲜湿米粉的品质特性,酵母菌主要影响其风味成分,这与易翠平等[26]结论一致。

3 结论

本研究将筛选得到的干酪乳杆菌、酿酒酵母菌与植物乳杆菌协同发酵,并对产酸能力、植物乳杆菌活菌数、理化性质、蒸煮特性、质构特性、挥发性风味物质进行测定。结果显示,协同发酵生产的发酵米粉品质良好,挥发性风味物质显著增加。其中L.p.9+S.c.23+L.c.17产酸能力最强,植物乳杆菌活菌数最高,达到(9.06±0.15) lg CFU/g。在降低蛋白质、脂肪含量,提高直链淀粉含量方面优于其他组,在蒸煮特性和质构特性上也是发酵组中最佳。L.p.9+S.c.23+L.c.17共检测出38种挥发性风味成分,种类最多,主要呈味物质为酯类和醇类。因此,多菌种协同发酵得到的米粉品质和风味良好,有利于微生物菌剂的开发和在米粉产业中的广泛应用。

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Quality and flavor characteristics of fresh rice noodles produced by co-fermentation

REN Yuanyuan*, LI Yuhang, MENG Zikuan, ZHANG Xin, ZOU Yu, WANG Yongjun

(Sichuan Food and Fermentation Industry Research and Design Institute Co., Ltd, Chengdu 611130, China)

ABSTRACT In order to explore the effect of different microbial combinations on the quality and flavor of fresh rice noodles, Saccharomyces cerevisiae 23(S.c.23), Lactobacillus casei 17 (L.c.17), Lactobacillus plantarum 9 (L.p.9) were used for synergistic fermentation. The acid production capacity, viable count of L. plantarum, physical and chemical properties, cooking characteristics, texture characteristics and volatile flavor substances were determined. The results showed that the quality of fermented rice noodles produced by co-fermentation was good, and the volatile flavor substances increased significantly. The acid production capacity of L.p.9+S.c.23+L.c.17 was the highest, and the viable count of L. plantarum reached (9.06 ± 0.15) lg CFU/g, the protein and fat contents were significantly decreased, and the amylose content was significantly increased. The cooking loss rate, hardness and elasticity of rice noodles prepared by L.p.9 + S.c.23 + L.c.17 were better than those of other groups. L.p.9 + S.c.23 + L.c.17 fermented rice noodles had 37 kinds of volatile flavor compounds, mainly esters and alcohols. Multi-strain synergistic fermentation significantly improved the quality of fresh rice noodles and increases the flavor, which has good application potential in the development of fermented rice noodles industry.

Key words co-fermentation; fresh rice noodles; Lactobacillus plantarum; Saccharomyces cerevisiae; Lactobacillus casei; quality characteristics; flavor

DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.030614

引用格式:任元元,李宇航,孟资宽,等.协同发酵生产的鲜湿米粉及其品质特性和风味研究[J].食品与发酵工业,2022,48(11):185-191.REN Yuanyuan, LI Yuhang, MENG Zikuan, et al.Quality and flavor characteristics of fresh rice noodles produced by co-fermentation[J].Food and Fermentation Industries,2022,48(11):185-191.

第一作者:硕士,高级工程师(通信作者,E-mail:443112258@qq.com)

基金项目:四川省科技计划重点研发项目(2020YFN0148)

收稿日期:2021-12-28,改回日期:2022-01-28