鲣鱼(Katsuwonus pelamis),俗名炸弹鱼,是金枪鱼品种之一。据统计,全球鲣鱼总捕捞量大约占金枪鱼总捕捞量的70%以上,是我国金枪鱼捕捞量最大的品种[1]。鲣鱼具有髙蛋白、低脂肪的特点,营养价值高。鲣鱼因其腥味较重,很少鲜食,目前主要加工为罐头或鲣鱼块。在鲣鱼蒸煮加工过程中,会产生大量蒸煮液,目前,这些蒸煮液以废物形式排放处理。有研究表明,其蒸煮液中含有大量蛋白质、氨基酸与不饱和脂肪酸等多种营养成分与风味物质,是发生美拉德反应与脂质热降解进行风味改良的良好风味前体物质,是生产调味品、蛋白营养强化剂等食品的优质原料。并且其中还含有丰富的肽类生物活性物质,如肌肽(carnosine)、鹅肌肽(anserine)等,因其含有组氨酸残基被统称为组氨酸二肽,已有文献报道组氨酸二肽在抗氧化、降血尿酸、降血脂、治疗退行性认知障碍等方面有巨大的应用潜力[2]。
目前对水产品中蒸煮液的研究主要集中在调味品研制与活性肽提取等方面。徐永霞等[3]以鳀鱼蒸煮液为原料,通过酶解得到海鲜调味料,并对其风味特性进行分析,表明了鳀鱼蒸煮液是一种优质的风味原料;林云等[4]以鲭鱼蒸煮液为原料,通过酶解、超滤发现分子质量<1 ku的组分具有较强的抗氧化活性和血管紧张素转化酶抑制活性。DJELLOULI等[5]以南美白对虾蒸煮液为原料,以粪肠球菌DM19水解得到具有较强抗氧化性的多肽。上述表明了水产品蒸煮液营养成分丰富,具有开发功能食品与调味品的潜在优势。然而,鲣鱼蒸煮液由于量大,难于保存,工厂通常未经处理直接排放,该处理方式不仅浪费资源,而且会造成环境污染,鲣鱼蒸煮液没有得到良好的开发利用,降低了其利用价值;同时,鲣鱼蒸煮液的化学组成特性尚未具体了解,限制了鲣鱼蒸煮液的高值化利用。
因此,本文以鲣鱼蒸煮液为原料,测定鲣鱼蒸煮液的基本营养成分,通过高效液相色谱测量游离氨基酸组成与活性物质组氨酸二肽,通过硅胶柱层析法分离其脂质组分,运用GC-MS测定其脂肪酸与挥发性物质,评价其营养品质与风味价值,以期为鲣鱼蒸煮液的高值化利用提供数据参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
鲣鱼蒸煮液,浙江融创食品有限公司;盐酸、氢氧化钠、浓硫酸、丙酮、三氯甲烷、无水乙醚为分析纯,西陇科学股份有限公司;二氯甲烷、甲醇、正己烷为色谱纯,西陇科学股份有限公司;14% BF3-CH3OH溶液;160～200目硅胶,青岛海洋化工有限公司。
1.2 仪器与设备
3 k-15台式高速冷冻离心机,Sigma公司;FDU-1100型真空冷冻干燥机,日本岛津公司;TQ8050 NX型气相色谱-质谱联用仪,日本岛津公司;CCA-1111型旋转蒸发仪,上海爱朗仪器有限公司;超高效液相色谱仪,Waters。
1.3 实验方法
1.3.1 原料处理
鲣鱼蒸煮液从浙江融创食品有限公司通过冷链运输至实验室,经过离心、置于旋转蒸发器,在45 ℃、30 Pa的条件下进行浓缩,浓缩后的蒸煮液冷冻干燥,置于干燥器中备用。
1.3.2 基本营养成分测定
水分含量测定:参考GB 5009.3—2016 《食品安全国家标准 食品中水分的测定》;灰分含量测定:参考GB 5009.4—2016 《食品安全国家标准 食品中灰分的测定》;粗蛋白含量测定:参考GB 5009.5—2016 《食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》:粗脂肪含量测定:参考GB 5009.5—2016 《食品安全国家标准 食品中脂肪的测定》。
1.3.3 总氨基酸组成分析
称取0.10 g鲣鱼蒸煮液冻干粉,加入10 mL 6 mol/L盐酸溶液(含0.1%苯酚),在110 ℃干燥箱内水解24 h,冷却后定容至20 mL,量取10 mL蒸干,2 mL超纯水定容,参考文献[6]进行衍生,吸取1 mL溶液过0.22 μm滤膜转移至进样品,采用高效液相色谱仪进行测定。
色谱条件:Athena AAA(250 mm×4.6 mm),流动相A:V(甲醇)∶V(乙腈)∶V(水)=20∶60∶20;流动相B:50 mmol/L醋酸钠水溶液(pH 6.5);流速:1 mL/min;柱温35 ℃,检测波长254 nm,进样量:5 mL。
1.3.4 脂肪酸组成分析
参考文献[7]的方法,稍作修改进行脂质提取,取鲣鱼蒸煮液冻干粉5.0 g,加入2 mL水,采用氯仿/甲醇(体积比2∶1)法萃取总脂后,用于脂肪酸分析与脂质组成分析,参照文献[8]进行脂肪酸甲酯化,在气相色谱质谱仪上测定分析。
色谱条件:参考文献[9]进行测定,InertCap® Pure-WAX石英毛细柱(30 m×0.25 mm,0.25 mm),载气为氦气。初始温度80 ℃保持2 min,以10 ℃/min速度升至120 ℃保持5 min;再以3 ℃/min的速度升至195 ℃保持10 min,以15 ℃/min的速度升至235 ℃保持23 min,最后以10 ℃/min的速度升至255 ℃保持18 min。
质谱条件:接口温度250 ℃,离子源温度230 ℃,采用EI离子源,扫描范围33～550 m/z。
1.3.5 脂质组分分析
将硅胶活化后,用V(二氯甲烷)∶V(正己烷)=2∶3浸泡湿法装柱,参考文献[9]进行洗脱,旋蒸称重,即为各脂质组分含量。
1.3.6 组氨酸二肽测定
称取0.10 g鲣鱼蒸煮液冻干粉定容与10 mL容量瓶,吸取1 mL溶液过0.22 mm滤膜转移至进样品,采用高效液相色谱仪进行测定。
色谱条件:ZORBAX SB-Phenyl(250 mm×4.6 mm),V[20 mmol/L磷酸氢二钾(pH 7.8)]∶V(甲醇)=85∶15;流速:0.6 mL/min;柱温25 ℃,检测波长210 nm,进样量:10 mL。
1.3.7 挥发性物质测定
取10 mL鲣鱼蒸煮液装入20 mL顶空萃取瓶中,萃取头为DVB/CAR/PDMS,萃取温度60 ℃,萃取时间35 min,采用TQ8050 NX型气相色谱-质谱联用仪进行分析。
色谱条件:选用InertCapRPure-WAX石英毛细管柱(60 m×0.25 mm,0.25 μm),载气为氦气。初始温度40 ℃,保持3 min;以4 ℃/min升温至100 ℃,保持2 min,以8 ℃/min升温至230 ℃,保持1 min。
质谱条件:离子源温度230 ℃,分析采用EI离子源,扫描范围为20～350 m/z。
1.4 数据分析
所有实验均平行测定3次,结果以平均值±标准差(X±SD)表示。用JMP Pro 14.0软件对数据进行分析,图形均采用Origin 2021软件绘制。
2 结果与分析
2.1 一般营养成分分析
鲣鱼蒸煮液测得其水分含量为(93.26±0.01)%,其基本营养成分如表1所示。由表1可知,鲣鱼煮液冻干粉中粗蛋白含量高达(55.69±0.38)%,高于小龙虾水煮液与鲣鱼精巢;粗脂肪为(0.58±0.04)%,低于小龙虾水煮液与鲣鱼精巢;根据文献报道鲣鱼是低脂肪高蛋白鱼类,扁舵鲣鱼蛋白含量与脂肪含量分别为(24.65±0.18)%、(1.85±0.09)%[12],这说明其加工蒸煮液也是一种高蛋白低脂肪副产物;鲣鱼蒸煮液中灰分为(32.42±0.02)%,远高于小龙虾水煮液与鲣鱼精巢,鲣鱼蒸煮液灰分含量较多,这可能与其加工方式有关,因此富含丰富的矿物质。
表1 鲣鱼蒸煮液一般营养成分(干基计) 单位:g/100 g
Table 1 General composition in Katsuwonus pelamis cooking liquid (in dry weight)
指标灰分粗脂肪粗蛋白水份鲣鱼蒸煮液32.42±0.020.58±0.0455.69±0.386.10±0.01小龙虾水煮液[10]23.42±1.684.41±0.2947.33±0.06/鲣鱼精巢[11]3.34±0.1410.36±0.7952.71±0.42/
2.2 总氨基酸组成
鲣鱼蒸煮液冻干粉总氨基酸组成如表2所示,共检测16种氨基酸,其中色氨酸(Trp)被分解,未作分析。必需氨基酸7种,非必需氨基酸9种,其中必需氨基酸占氨基酸总量的(22.07±0.37)%。总氨基酸中甘氨酸含量最高,约占(19.51±0.18)%,是内源性抗氧化剂还原性谷胱甘肽的组成氨基酸,机体发生严重应激时的组成氨基酸,也被称为半必需氨基酸[13]。此外,组氨酸与丙氨酸的含量也较高,分别占总氨基酸的(14.64±0.74)%、(8.99±0.90)%,这2种氨基酸是合成抗氧化活性肽肌肽与鹅肌肽的前体物质,甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸的含量都较高,这与金枪鱼鱼皮中提取的明胶相似[14];含量最少的是酪氨酸,仅占(1.03±0.20)%。支链氨基酸占氨基酸总量的(9.39±0.01)%,是芳香族氨基酸的3倍左右,具有保肝功效。根据文献报道,当N端为碱性氨基酸(Arg、His、Lys),C端或N端氨基酸带疏水性氨基酸(Pro、Phe、Tyr等)时,与血管紧张素转换酶亲和力较强,对其酶活性有较强的抑制作用[15-16];鲣鱼蒸煮液中的碱性氨基酸占(26.28±2.25)%,疏水性氨基酸占(16.56±0.44)%,是制备降血压肽的理想原料。
由表3可知,必需氨基酸评分最高的是赖氨酸,氨基酸评分为61,高于联合国粮农组织在1985年提出的氨基酸参考值;其次是苏氨酸和甲硫氨酸,氨基酸评分分别为52与44,第一限制氨基酸为异亮氨酸,第二限制氨基酸为苯丙氨酸+酪氨酸。
根据文献报道,谷氨酸和天冬氨酸能为食品提供鲜味,决定食品的鲜美程度,天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸和精氨酸等5种鲜味氨基酸的含量占(45.79±0.16)%,鲜味氨基酸含量较高,是制作调味品的优质来源,这些氨基酸也是参与美拉德反应产生风味物质前体物质;氨基酸Strecker降解可生成烃类、醛类、吡嗪类、醇类等多种重要香气化合物的重要途径[17]。因此,鲣鱼蒸煮液中,氨基酸的营养价值不仅高,而且是生产调味品的重要前体原料。
表2 鲣鱼蒸煮液总氨基酸组成分析(干基计)
Table 2 The relative content of the amino acids in Katsuwonus pelamis cooking liquid (in dry weight)
氨基酸名称相对百分含量/%天冬氨酸(Asp)3.26±0.13谷氨酸(Glu)7.00±0.05丝氨酸(Ser)3.02±0.26甘氨酸(Gly)19.51±0.18组氨酸(His)14.64±0.74精氨酸(Arg)7.03±0.74苏氨酸(Thr)3.67±0.73丙氨酸(Ala)8.99±0.90脯氨酸(Pro)13.45±0.90酪氨酸(Tyr)1.03±0.20缬氨酸(Val)2.96±0.18甲硫氨酸(Met)2.32±0.07异亮氨酸(Ile)2.12±0.10亮氨酸(Leu)4.31±0.09苯丙氨酸(Phe)2.08±0.25赖氨酸(Lys)4.61±0.77氨基酸总量/必需氨基酸22.07±0.37非必需氨基酸77.93±0.37支链氨基酸9.39±0.01芳香族氨基酸3.10±0.46EAA/TAA22.07±0.37EAA/NEAA28.32±0.61
注:EAA代表必需氨基酸(essential amino acid)、TAA代表氨基酸总量(total amino acids)、NEAA代表非必需氨基酸(non-essential amino acids)
表3 鲣鱼蒸煮液必需氨基酸评分
Table 3 Amino acids score of protein in Katsuwonus pelamis cooking liquid
氨基酸名称氨基酸含量/(mg·g-1)FAO/WHO推荐氨基酸参考值/(mg·g-1)氨基酸评分异亮氨酸(Ile)14.354036亮氨酸(Leu)28.687041赖氨酸(Lys)33.755561苯丙氨酸(Phe)+酪氨酸(Tyr)22.456037缬氨酸(Val)18.585037苏氨酸(Thr)20.704052甲硫氨酸(Met)15.513544
2.3 脂肪酸组成
鲣鱼蒸煮液冻干粉脂肪酸组成如表4所示,共检测出20种脂肪酸,脂肪酸种类丰富,其中饱和脂肪酸7种,占脂肪酸总量的(38.31±0.65)%,单不饱和脂肪酸6种,占脂肪酸总量的(30.83±0.77)%,多不饱和脂肪酸7种,占脂肪酸总量的(30.86±1.42)%。相关研究表明,不饱和脂肪酸不但具有降低血糖、血脂、抑制动脉粥样硬化等作用,而且对心脑血管疾病防治、抗癌、抗过敏和免疫调节有积极作用[18];扁舵鲣鱼鱼肉的饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸分别为33.24%、28.62%、37.93%,对比鲣鱼肉中脂肪酸含量,两者单不饱和脂肪酸的含量相近,而鲣鱼蒸煮液冻干粉饱和脂肪酸含量增高,饱和脂肪酸C16∶0含量最多,这也符合C16∶0在海水鱼中含量均相对较高的现象[12]。n-3系列多不饱和脂肪酸的含量为(28.61±1.32)%,其中二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)贡献最大,其含量为(27.65±1.40)%,DHA(C22∶6)含量最多为(23.69±0.69)%,DHA与EPA具有促进婴儿生长发育、降低血脂、预防心脏病等作用[19];n-6系列多不饱和脂肪酸的含量为(1.00±0.04)%,n-6系列多不饱和脂肪酸含量过高会增加人体的代谢压力,损害机体,n-3系列多不饱和脂肪酸是n-6系列多不饱和脂肪酸的28倍左右,能够弥补饮食中n-3系列摄入不足的问题,有利于人类的健康与营养[20]。
表4 鲣鱼蒸煮液脂肪酸组成(干基计)
Table 4 The relative content of the fatty acid composition in Katsuwonus pelamis cooking liquid (in dry weight)
脂肪酸种类相对百分含量/%C14∶00.66±0.08C16∶021.54±0.31C16∶17.14±0.92C17∶01.76±0.19C18∶010.11±0.20C18∶1n9c0.73±0.05C18∶1n9t17.66±0.74C18∶2n6c0.18±0.01C18∶3n30.96±0.06C18∶41.25±0.08C20∶03.02±0.03C20∶12.40±0.10C20∶40.06±0.02C20∶5(EPA)3.96±0.62C22∶00.75±0.12C22∶10.45±0.07C22∶50.76±0.08C22∶6(DHA)23.69±0.69C24∶00.49±0.07C24∶12.45±0.04EPA+DHA27.65±1.40饱和脂肪酸38.31±0.65单不饱和脂肪酸30.83±0.77多不饱和脂肪酸30.86±1.42n-3系列多不饱和脂肪酸28.61±1.32n-6系列多不饱和脂肪酸1.00±0.04
2.4 脂质组成
鲣鱼蒸煮液冻干粉脂质组成如表5所示,极性脂质磷脂含量占总脂的(41.54±3.59)%,磷脂广泛存在于生物细胞内,是细胞膜的重要组成部分,具有多种生理功能,脑磷脂含量最高占总脂质的(33.40±5.69)%,脑磷脂具有抗氧化的作用,在健脑、美容、防衰老、保护心血管等方面有着良好的效果[21];其次为中性脂质甘油三酯含量占总脂的(26.02±0.97)%,鲣鱼蒸煮液脂质组成与鲣鱼鱼卵的测定结果相似,磷脂(50%～55%)与甘油三脂(38.71%～46.28%)含量最高[22],是脂质的主要组成成分,同时也是产生特殊风味的前体物质[23];鲣鱼蒸煮液其胆固醇酯与胆固醇分别为(10.63±1.44)%、(6.89±1.35)%,含量较低,说明鲣鱼蒸煮液脂质具有高磷脂、低胆固醇的特点,具有较高的营养价值。
脂质通过热降解会产生小分子的醛类、酮类等低阈值的香气化合物及其含有的羰基化合物会参与美拉德反应进一步生成挥发性物质。脂质热降解主要是不饱和脂肪酸发生热降解,而磷脂中含有较多的不饱和脂肪酸,脂质是产生风味的重要前体物质。
表5 鲣鱼蒸煮液脂质组成(干基计)
Table 5 The relative content of the lipid composition in Katsuwonus pelamis cooking liquid (in dry weight)
脂质组成相对百分含量/%胆固醇酯10.63±1.44甘油三酯26.02±0.97胆固醇 6.89±1.35脑磷脂 33.40±5.69其他磷脂2.57±2.38卵磷脂 5.57±0.28甘油二酯14.92±4.46
2.5 功能营养成分
由图1可知,肌肽、鹅肌肽标准品的出峰时间分别为5.367、7.106,两者的分离良好,色谱峰对称,可用于肌肽与鹅肌肽的定性定量测定。鲣鱼蒸煮液组氨酸二肽测定如表6所示。经过测定,鲣鱼蒸煮液冻干粉中的肌肽含量为(10.43±2.74) mg/g,鹅肌肽含量为(19.24±1.78) mg/g;组氨酸二肽主要存在于要脊椎动物,王春月等[24]对舟山海域的常见经济物种的组氨酸二肽进行测定,经测定鲣鱼中的肌肽含量为1.12 mg/g;鹅肌肽含量为4.66 mg/g,是所测物种中组氨酸二肽含量相对较高的物种,鲣鱼蒸煮液冻干粉中组氨酸二肽含量明显高于鲣鱼中的含量,这是由于组氨酸二肽易溶于水,而鲣鱼蒸煮液中大部分是水溶性低聚肽。组氨酸二肽除了具有显著的抗氧化、缓冲pH、抗疲劳、降血糖等多种生物功能,肌肽和鹅肌肽还会与烹饪过程中产生的丙烯酰胺形成加合物,从而减少丙烯酰胺的含量[25],可作为功能性营养成分加入调味料鸡精中。目前,国内大多数采用体外合成方法或从脊椎动物或深海鱼的肌肉中提取组氨酸二肽,但均存在成本较高的缺点,而鲣鱼蒸煮液富含组氨酸二肽,并且是加工废液,这说明鲣鱼蒸煮液是制备组氨酸二肽的可选原料。
图1 肌肽、鹅肌肽标准品色谱图
Fig.1 Chromatographic chart of carnosine and anserine standard
表6 鲣鱼蒸煮液组氨酸二肽测定(干基计)
Table 6 The content of histidine dipeptide in Katsuwonus pelamis bonito cooking liquid
指标肌肽/(mg·g-1)鹅肌肽/(mg·g-1)鲣鱼蒸煮液10.43±2.74 19.24±1.78鲣鱼1.124.67 短尾大眼鲷0.024.13
2.6 挥发性物质
鲣鱼蒸煮液挥发性化合物如表7所示,从鲣鱼蒸煮液中共检测到38种挥发性风味化合物,其中烷烃类10种,相对百分含量(41.19±0.29)%,醛类15种,相对百分含量(35.98±0.27)%,酮类6种,相对百分含量(13.74±0.01)%,杂环类3种,相对百分含量(8.57±0.01)%,醇类3种,相对百分含量(5.25±0.15)%。烷烃类含量多,风味阈值较高,近似无味,总体上对风味贡献不大[26]。醇类物质与醛类化合物主要由多不饱和脂肪酸氧化产生,醇类化合物风味阈值也较高,但不饱和醇类化合物阈值低,鲣鱼蒸煮液的1-辛烯-3-醇相对含量(3.99±0.04)%,具有蘑菇味,是普遍存在于淡水鱼及海水鱼的挥发性香味物质[27]。而一般饱和的C8～C12醛类物质具有青草香、脂肪香的气味,且阙值较低,戊醛、辛醛、壬醛相对含量分别为(0.56±0.09)%、(2.98±0.01)%、(2.17±0.10)%,为食品中重要的气味物质[28]。但己醛、庚醛和2,4-二烯癸醛等通常会产生鱼腥味,己醛、庚醛和2,4-二烯癸醛相对含量分别为(6.21±0.18)%、(1.71±0.08)%、(2.77±0.27)%,是水煮液中产生腥味关键成分[29];鲣鱼蒸煮液虽然具有一定的腥味,但是其含有丰富的呈味氨基酸、组氨酸二肽、脂质热降解的不饱和脂肪酸,如果将其进行酶解脱腥并结合美拉德反应、脂质热降解进行风味改良,将是海鲜调味料的良好原料。陈启航等[30]通过对鲣鱼蒸煮液进行酶解、脱腥和美拉德反应,将鲣鱼蒸煮液制成鲜味佳且含有丰富游离氨基酸的海鲜调味料。可见鲣鱼蒸煮液可以进一步开发出以鲜味为特征且营养较高的调味品。
表7 鲣鱼蒸煮液挥发性物质分析
Table 7 The volatile components identified in Katsuwonus pelamis cooking liquid
中文名称相对百分含量/%风味描述醛类(15种)2-庚烯醛0.88±0.162,4-癸二烯醛2.77±0.27鱼腥味2-十一烯醛0.62±0.022-辛烯醛3.30±0.14鱼腥味、油脂香2,4-庚二烯醛6.76±0.302-癸烯醛2.19±0.04蜡香、脂香2-己烯醛1.78±0.122-壬烯醛2.55±0.032-戊烯醛0.91±0.04庚醛1.71±0.08鱼腥味壬醛2.17±0.10油脂、青草味十七碳-8,11-二烯醛0.58±0.06己醛6.21±0.18鱼腥味、酸腐味戊醛0.56±0.09果香、面包味辛醛2.98±0.01油脂、青草味总和35.98±0.27酮类(6种)3,5-辛二烯-2-酮1.41±0.032,5-辛二酮0.88±0.041-辛烯-3-酮1.08±0.012-壬酮1.53±0.123-癸烯-2-酮7.64±0.102-十一酮1.20±0.09总和13.74±0.01烷烃类(10种)1,8,11,14-十七碳四烯0.61±0.111-乙基-1-甲基环戊烷0.38±0.052,6,10,14-四甲基十五烷6.73±0.203,5,5-三甲基2-己烯0.75±0.14正十四烷0.63±0.10正十七烷26.90±0.17正十九烷0.64±0.02正二十一烷3.14±0.191-十二碳烯-3-炔1.00±0.036-十三烯-4-炔0.42±0.09总和41.19±0.28醇类(3种)1-戊烯-3-醇0.67±0.031-辛烯-3-醇3.99±0.04蘑菇味反式-2-辛烯-1-醇0.59±0.07总和5.25±0.15杂环类(3种)2-戊烯基呋喃4.91±0.252-乙基呋喃1.36±0.302-正戊基呋喃2.98±0.01总和8.57±0.02芳香族(1种)苯甲醛0.52±0.02果香味
3 结论
本文以鲣鱼蒸煮液为原料,对鲣鱼蒸煮液进行其营养品质与风味价值的评价。根据成分分析可知,鲣鱼蒸煮液具有高蛋白、低脂肪、富含矿物质的特点;含有丰富的不饱和脂肪酸、EPA、DHA及各种氨基酸,不仅是重要的营养成分,也是重要的风味前体物质,为进行美拉德反应与脂质热降解提供丰富的底物;其脂质具有高磷脂、低胆固醇的特点;而通过对其挥发性物质进行分析发现,醛类是其风味的重要组成部分,己醛、庚醛、2,4-二烯癸醛和1-辛烯-3-醇是鲣鱼蒸煮液产生腥味的重要原因。通过对功能成分进行测定,发现其组氨酸二肽含量高于鲣鱼。本研究可为鲣鱼蒸煮液的高值化利用提供研究基础,为提高水产资源综合利用率提供技术支持,具有显著的经济效益与社会价值。
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