蝉花(Cordyceps chanhua)又名大蝉草菌、虫花、蝉蛹草等,为蝉拟青霉感染蝉科山蝉幼虫所形成的虫菌复合体,分类学地位属于菌物界(Fungi),子囊菌门(Ascomycota),粪壳菌纲(Sordariomycetes),肉座菌亚纲(Hypocreomycetidae),肉座菌目(Hypocreales),虫草菌科(Cordycipitaceae)[1]。蝉花是我国分布比较广泛的虫草类真菌,主要分布在浙江、江苏、安徽、湖北、湖南、广东、四川、云南、福建和台湾等地,此外,南亚、欧洲、北美等地亦有分布[2]。蝉花具有悠久的药用历史,最早记录可见于公元五世纪南北朝时期雷斅的《雷公炮炙论》,“蝉花,凡使,要白花全者。凡收得后,于屋下东南角悬干,去甲、土后用浆水煮一日,至夜,焙干,碾细用之”,宋代唐慎微撰《证类本草》中记载其“味甘,寒,无毒。主小儿天吊,惊痫螈,夜啼心悸”,李时珍的《本草纲目》记载“蝉花可治疗惊痫,夜啼心悸,功同蝉蜕”等,传统中医认为蝉花性寒、味甘、无毒,能镇惊解痉,熄风散热,透疹止痒,明目退翳[3]。现代研究表明蝉花具有多种生理功效,如免疫调节、抗肿瘤、抗疲劳、改善肾功能等。已在蝉花中发现含有核苷类、甾醇、多糖、芳香族物质、氨基酸等多种与冬虫夏草及蛹虫草中相同的物质成分,因此,有学者认为蝉花可作为冬虫夏草的替代品使用[4-5]。2021年我国卫生健康委员会批准人工培育的蝉花子实体可作为新食品原料使用,将蝉花的应用领域从传统中医药拓展到食品领域,应用范围进一步扩大,使得未来蝉花需求量急剧增加,市场潜力巨大。
虽蝉花的研究不如冬虫夏草和蛹虫草等虫草类真菌的研究多,研究起步也相对较晚,但近几十年来,对蝉花的研究也取得了一定的进展。本文主要从蝉花物质成分、人工培养技术、生物活性作用、组学进展等方面进行综述概括,以期为蝉花的基础研究及在食品、药品、化妆品等多领域的应用开发提供参考。
1 蝉花的物质成分
蝉花、冬虫夏草、蛹虫草作为颇具代表性的虫草真菌。研究已证实蝉花含有丰富的营养成分和多种活性物质成分,目前已从蝉花中分离到氨基酸、脂肪酸等营养物质成分以及核苷类、多糖类、甾醇类等多种功能活性物质。
1.1 营养物质成分
蝉花富含蛋白质、必需氨基酸、不饱和脂肪酸、矿物质元素等多种营养成分物质,具有较高的营养价值。研究表明蝉花中粗蛋白含量较高,野生蝉花蛋白质含量为19.65%,蝉花菌丝体蛋白质含量为25.38%,孢梗束、菌丝体、野生蝉花的蛋白含量对比为:蝉花孢梗束>蝉花液体发酵菌丝体>野生蝉花,且富硒培养可提高蝉花孢梗束的蛋白质含量;蝉花中富含18种氨基酸,必需氨基酸含量较高,可达40%,必需氨基酸的含量对比为:蝉花液体发酵菌丝体>野生蝉花>蝉花孢梗束,富硒可提高氨基酸中蛋氨酸、甘氨酸、丙氨酸的含量[6-8]。测定发现蝉花中含有亚油酸、软脂酸、棕榈油酸、花生酸、花生一烯酸、花生二烯酸、油酸甲酯等17种脂肪酸,其中亚麻油酸、油酸的相对含量为53.91%和20.63%[9]。矿物质元素作为人体所需的重要营养元素,在调解代谢、维持体内酸碱平衡等方面具有重要作用,蝉花中富含钙、铁、锌、硒等多种矿物元素[8,10]。对蝉花的营养成分文献总结发现,目前的研究主要集中在对野生蝉花、发酵菌丝体、蝉花孢梗束等的对比评价方面。
1.2 活性物质成分
1.2.1 多球壳菌素
多球壳菌素(myriocin)是一种由α-氨基酸和不饱和脂肪链组成的亲脂类氨基酸,分子式为C21H39NO6,具有强烈免疫特性,其免疫抑制作用是抑制鞘脂生物合成第一步反应,从而减少鞘脂前体物质的合成。1994年FUJITA报道在蝉花的液体培养中发现了多球壳菌素,具有显著免疫调节作用,在抑制小鼠异体混合淋巴细胞反应中,是环孢菌素A的免疫抑制能力的10～100倍,有望成为一种强有力的免疫抑制剂用于临床治疗中[11]。后续通过对多球壳菌素分子结构优化,获得FTY 720,诺华公司将其开发为一款名为Gilenya的药物,2010年9月由美国FDA批准上市,2019年我国药品监督管理局批准Gilenya在国内上市,可作为用于治疗复发性多发性硬化症的口服药物[12]。多球壳菌素主要存在蝉花的菌丝体中,YU等[13]采用柱前衍生化高效液相色谱测定蝉花菌丝体中多球壳菌素的含量为0.064～0.278 mg/g。
1.2.2 核苷类
核苷类化合物是蝉花中的重要活性物质成分,具有广泛的生理功效,目前在蝉花中已发现多种核苷类物质,如虫草素、腺苷、N6-(2-羟乙基)-腺苷[N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine,HEA]、腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟苷、鸟嘌呤、肌苷、次黄嘌呤、尿苷、尿嘧啶、脱氧胞苷、脱氧肌苷等。ZENG等[14]分析蝉花中的10种核苷类化合物(尿苷、2′-脱氧尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺嘌呤、腺苷、2′-脱氧腺苷、虫草素、尿嘧啶)的含量,发现在菌核和孢梗束中核苷的总量分别为4.392和3.016 mg/g。葛琦等[15]采用LC-MS分析蝉花中核苷类成分,首次在蝉花中发现脱氧胞苷和脱氧肌苷。
虫草素作为第一个从真菌中分离出来的核苷类化合物,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血脂等多种生物活性作用,在多种虫草类真菌中均有测得,常被作为评价虫草类真菌品质的一个重要指标。蝉花中虫草素的含量为0.02 mg/g,蝉花菌丝体中虫草素的含量为2.77 mg/g[4,16]。不同地区的蝉花虫草素含量差异较大,张洪梅等[17]比较10批不同产地蝉花中虫草素的含量发现,四川宜宾产的蝉花虫草素含量最高,可达0.191 mg/g。虫草素按其溶解性,水、醇均可溶解,目前在虫草素的提取中常采用水、乙醇提取的文献较多,LU等[18]采用水提取蝉花,提取物中检测到了虫草素,而采用甲醇提取,提取物中未检测到虫草素,这一结果值得关注。
HEA为蝉花中颇具开发潜力的核苷成分,同时也是第一个从真菌中分离出的Ca2+拮抗剂,分子式为C11H17N5O5,分子质量为311.29,已被证实具有抗辐射、镇静、免疫、抗肿瘤、抗炎、肾脏保护、降糖等多种生物活性作用[19]。HEA是由FURUYA等[20]1983年在3种虫草和4种棒束孢中首次检测发现。张红霞等[10]测定以蚕蛹为基质培养的蝉花孢梗束中HEA的含量为0.2 mg/g,雷帮星等[21]通过优化蝉拟青霉122菌株培养条件,菌丝体中HEA的含量可达(130.22±0.60) mg/L。厉晓腊[22]研究蝉拟青霉液体深层发酵技术,在70 L液体发酵罐中深层发酵培养,HEA的含量可达到35.9 mg/L。LU等[18]对野生蝉花和人工培养蝉花的子实体中的HEA含量进行测定,采用甲醇提取测定野生蝉花和人工培养蝉花HEA的含量分别为(2.884±0.589)、(0.834±0.005) mg/g;采用水提测定野生蝉花和人工培养蝉花HEA的含量分别为(1.925±0.025)、(7.025±1.420) mg/g。
1.2.3 麦角甾醇
麦角甾醇作为食用菌的有效活性成分之一,在抗炎、降脂、防癌、免疫调节等方面具有显著功效[23],主要存在于蝉花的菌丝体中,目前从蝉花中分离出来的有麦角固醇和麦角甾醇过氧化物。在蝉花菌丝体中麦角甾醇的含量为0.6256 mg/g[8]。张洪梅等[17]对我国10批不同产地蝉花中麦角甾醇的含量进行测定,其含量范围在0.120～0.301 mg/g,不同产地蝉花的麦角甾醇的含量有一定的差异性,但差异不如腺苷、虫草素的差异大。SHI等[24]通过对培养基优化,将麦角甾醇的产量提高5倍,可达0.256 mg/L。KUO等[25]从蝉花中分离出麦角甾醇过氧化物Cpd 6A (C28H44O3),可抑制T细胞的增殖。
1.2.4 多糖类
多糖因对人体具有多种有益作用而广受关注,多糖也是蝉花中最重要的活性成分之一,在菌丝体、孢梗束中均含有丰富的多糖,菌丝体中多糖的含量为33.2 mg/g[8],孢梗束中多糖的含量为1.17%[10]。目前已从蝉花中分离出了C3、CI-P、CI-A、CPA-1、CPB-1、PCIPS3、EPS1、EPS2 和Pc-01等多种多糖组分。对分离出的多糖的研究目前主要集中在单糖组成、分子质量、连接方式等一级结构的解析上。如UKAI等[26]对蝉花中分离出水溶性半乳甘露聚糖C3结构解析为:分子质量为27 000 Da,由甘露糖和半乳糖组成,物质比为4∶3,主链由α-D-(1→2)和α-D-(1→6)-甘露糖组成,支链由O-6连接β-D-半乳糖和以O-2连接α-D-甘露糖。KIHO等[27]从蝉花虫体部分分离出来两种半乳甘露聚糖CI-P和CI-A,结构解析发现CI-P和CI-A都是由甘露糖和半乳糖构成,物质比分别为1∶0.85和1∶0.57,两种多糖的分子质量约为25 000 Da,两者均为高度支化的半乳甘露聚糖,主链均由α-D-(1→6)甘露糖组成,支链由半乳聚糖和甘露糖构成。导致蝉花中分离出的多糖一级结构差异的原因可能是与菌株、培养条件、采样部位及提取纯化方法等不同有关。而对蝉花多糖的高级结构解析研究的相对较少。目前,仅有1篇采用原子力显微镜等对蝉拟青霉菌丝体多糖PCIPS2高级构象进行研究[28]。而多糖的高级结构对其生理活性等具有重要意义,有待深入研究。
透明质酸作为一种酸性黏多糖,具有高度保水性和高度黏弹性等作用,在生物医药和美容化妆品等领域具有广泛的应用前景,市场潜力巨大。研究发现蝉拟青霉可产透明质酸,产透明质酸的能力最高可达11.35 mg/mL[29],因此,未来有望开发为透明质酸的生产菌株。
1.2.5 虫草酸
虫草酸又名D-甘露醇,是虫草类真菌特有的活性成分,具有预防治疗脑血栓、脑出血、心肌梗塞等功效,蝉花中虫草酸的含量为78.57 mg/g,高于冬虫夏草和蛹虫草中虫草酸含量(冬虫夏草中虫草酸的含量77.27 mg/g,蛹虫草中虫草酸的含量43.36 mg/g)[4]。SHI等[30]通过优化培养条件,将虫草酸的含量提高2.07倍。覃丽霞等[31]发现培植24 d的孢梗束中的虫草酸含量最高,可达75.8 mg/g。
1.2.6 其他类
从蝉花菌丝体中发现的挥发性成分主要有萜类化合物、芳香族化合物、醇类、烷烃类、酯类和醛类等,其中 5-甲基-2-呋喃-乙酸酯、反式-2, 4-癸二烯醛、长叶烯等为蝉花中特有的挥发性物质[32];分离出新的环戊烯酮衍生物为2-(3-羧基-2-羟丙基)-3-甲基-2-环戊烯酮、新的呋喃衍生物为5-(2-羟乙基)-2-呋喃乙酸[33]。此外,已从蝉花中分离到多酚类、环肽类、酰胺类、吲哚类、酚酸类等物质成分[34-35]。
近几年利用代谢组学技术,从蝉花中鉴定出了具有一定生理活性的小分子物质,如:具有调节细胞生长、抗肿瘤等作用的鞘脂类;具有降血压、抗氧化、抗惊厥等抑制神经信息传递的γ-氨基丁酸;具有抗衰老、防止动脉硬化的抗氧化物质生育酚;以及乙酰肉碱、细胞松弛素E、海藻糖、δ-氨基-γ-酮戊酸、磷脂等生物活性物质[36-38]。
2 蝉花的培养方式
虽然蝉花与冬虫夏草相比,分布广泛,但是野生资源依然有限,无法满足市场需求。加之近年来,虫草类真菌营养价值及生物活性不断被认知,市场对蝉花需求不断增加,特别是当人工培养蝉花子实体被批准为新食品原料后,蝉花因其众多的生理功效作用,将成为食品、保健品的重要原料,未来蝉花类的相关产品也将越来越多,其需求量将急剧膨胀。因此,发展蝉花的人工培养技术将是解决这一问题的重要途径。蝉花的人工培养主要以蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)为菌种进行人工培养,目前已形成替代寄主昆虫人工培养、固体培养及液体发酵培养3种培养方式。
替代寄主昆虫人工培养是通过选择适合的寄主,常见有家蚕蚕蛹、柞蚕蚕蛹等,使菌丝体在寄主体内生长,可以得到最类似的虫菌复合体。这种仿生培养是蝉花人工培养的一个重要方向,目前研究主要集中在不同寄主筛选、替代寄主人工培养蝉花的成分分析等方面。通过筛选不同的寄主,发现家蚕幼虫和蚕蛹作为基质均能产生孢梗束,从感染率和产孢梗束来看,蚕蛹效果更好[39]。对人工柞蚕培养蝉花与野生蝉花的成分分析发现其成分类似[37]。以蚕蛹为培养基的蝉花孢梗束中腺苷、海藻糖和甘露醇含量明显高于麦仁培养基获得蝉花孢梗束,但粗多糖及HEA 含量低于麦仁培养基栽培获得的蝉花孢梗束[10]。
固体培养是指将蝉拟青霉(P.cicadae)接种在适宜的固体培养基上,是获得蝉花孢梗束及菌丝体的主要方式。目前关于蝉花固体培养的文献相对较少,主要集中在碳氮源的筛选对比、不同培养基组分对活性物质成分含量的影响等方面。如李忠等[40]通过比较不同碳氮源及碳氮比对蝉拟青霉菌丝体的生长发现:最适菌丝体生长的碳源为可溶性淀粉、最适氮源为蛋白胨,最适碳氮比是40∶1。谢春芹等[41]研究不同固体培养基对蝉花孢梗束的影响发现:最适培养基为小麦40 g,蛋清2 g,营养液60 mL。张忠亮等[42]对比不同的固体培养基[江苏农垦(SCM)、烟农24、烟农15、济麦22品种的小麦作为固体培养基]对蝉花的4种核苷类成分的影响,发现固体培养基 SCM培养的蝉花4 种核苷类成分的含量较高。
液体培养是目前获得蝉花菌丝体及蝉花中活性物质的主要方式,具有生产成本低、发酵时间短、发酵条件较可控等优点,相较于前两种培养方式,液体培养更易实现蝉花的产业化应用。在液体培养上,目前文献主要集中在筛选适合的培养基组分、培养条件、添加各类促生长因子如植物激素、昆虫激素、硒元素等,提高菌丝体生物量或活性物质成分含量[7]。表1为近几十年来学者在蝉花液体培养上的研究进展。此外,研究发现当向摇瓶培养基中添加蝉拟青霉同源多糖,其菌丝体的生物量和多糖的含量均受到明显抑制作用,随着同源多糖浓度的增加,反馈抑制作用增加,当同源多糖浓度达到2.2 g/L时,菌丝体的生长和多糖的产生则被完全抑制[43]。
表1 蝉花液体发酵技术
Table 1 The liquid fermentation of Cordyceps Chanhua
菌株优化方法优化培养基组成、培养条件等指标物及产量参考文献P.cicadae LB正交优化葡萄糖3%、蛋白胨1.5%、K2HPO4 0.1%、MgSO4·7H2O 0.05%(均为质量分数);培养温度25～27 ℃、pH 6～7、接种量6%、转速150 r/min、装液量100/500、发酵周期7 d生物量[44]P.cicadaeGZDXIFR4606响应面优化葡萄糖 20 g/L、蛋白胨 3 g/L、酵母膏 2 g/L、KH2PO4 1 g/L、MgSO4 0.5 g/L;接种量 6.65%、pH 6.00、温度24.01 ℃生物量:239.47 g/L[45]P.cicadae正交优化培养基:氮源:蛋白胨;碳源:葡萄糖;无机盐:KH2PO4;C/N:10∶1;培养条件:温度 >培养时间>pH>转速> 培养基的容量胞内、胞外多糖[46]P.cicadae ZC001响应面优化温度24.53 ℃、pH 7.46、发酵时间73.9 h多糖:356.02 μg/ml[47]P.cicadae正交优化马铃薯汁20%,KH2PO4 0.4%,蛋白胨 0.5%(均为质量分数)胞外多糖:5.64 g/L[48]P.cicadae正交优化培养基:蔗糖40 g/L、蛋白胨15 g/L、KH2PO4 1.5 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L;培养条件:pH 7.4、转速150 r/min、28 ℃、装液量40%生物量:1.852 g/L;多糖、虫草酸、虫草素依次为:107.45、95.82、17.77 mg/g[49]P.cicadae GZU-BCECW122正交优化培养基:蔗糖80 g/L,(NH4)2HPO4 2 g/L,KH2PO4 1 g/L,KCl 0.5 g/L,MgSO4 0.5 g/L, FeSO4 0.01 g/L;添加物:L-谷氨酸2.5 g/L、次黄嘌呤2.5 g/LHEA为5.48 mg/g[21]P.cicadae022007-9正交优化蔗糖1%、甘油0.5%、豆饼粉6%、酵母浸膏1%、KH2PO 0.05%、MgSO4·7H2O 0.075%、FeSO4·7H2O 0.001%、ZnSO4·7H2O 0.001%、CaCl2 0.01%(均为质量分数)HEA为45.4 mg/L[22]P.cicadae GZDXIFR4606单因素实验6%乳糖、0.5%(牛肉膏∶酵母膏=1∶1)、0.1%MgSO4·7H2O(均为质量分数)透明质酸11.35 mg/mL[29]P.cicadae YN-1响应面优化葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、酵母浸膏2 g/L、KH2PO4 1 g/L、MgSO4 0.5 g/L、pH 7.96、温度16.05 ℃、接种量9.27%镇痛成分P1 41.559 mg/L[50]P.cicadae RCEF1081正交优化麸皮3%、酵母粉4%、丝氨酸0.15%、KH2PO4 0.05%、MgSO4·7H2O 0.01%、CaCl2 0.02%(均为质量分数);接种量5%、培养温度25 ℃、转速130 r/min、培养4 d虫草素2.772 mg/g[16]P.cicadae非线性回归设计甘油40 g/L,酵母膏6.5 g/L,蛋白胨2 g/L, KH2PO4 2.4 g/L, MgSO4 2.4 g/L, ZnSO4 0.05 g/L,发酵时间73 h麦角甾醇256 μg/L[24]
3 蝉花的生物活性
蝉花作为传统的中药成分之一,近年来众多学者对其生物活性进行研究,发现其具有多种生物活性作用(见图1)。
3.1 免疫调节、抗肿瘤作用
蝉花具有免疫调节作用。免疫作用研究较多的活性物质为蝉花多糖。金丽琴等[51]研究发现蝉拟青霉总多糖使环磷酰胺所致免疫抑制大鼠组织细胞内乳酸脱氢酶(肾、胸腺)、精氨酸酶(肝、脾、胸腺)活力升高,具有显著差异;使脂质过氧化物(肾、脾、胸腺)的含量下降;使环磷酰胺所致的肝、脾内低下的还原型谷胱甘肽升高。因此,蝉拟青霉总多糖能增强免疫大鼠组织器官的免疫功能和加速自由基的代谢。KIM等[52]发现从蝉花菌丝中提取的多糖可通过TLR4信号激活巨噬细胞而具有免疫调节作用。此外,蝉花中多球壳菌素具有显著的免疫调节作用,现已作为治疗复发性多发性硬化症的口服药物[11-12]。
3.2 抗肿瘤、抗癌作用
研究发现蝉花具有抗肿瘤、抗癌作用。金丽琴等[53]对蝉拟青霉的总多糖研究发现,其能增加荷瘤小鼠白细胞数量,缓解环磷酰胺(cyclophosphamide, Cy)所致荷瘤小鼠白细胞数的降低,提高荷瘤小鼠的脾指数,联用小剂量Cy时明显增强其抑制肿瘤作用。XIE等[54]研究发现蝉花的乙醇提取物可通过诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡、细胞周期阻滞和内质网应激发挥抗肿瘤作用,可作为一种潜在的天然抗癌药物来源。WANG等[55]研究表明蝉花水体物通过G2/M细胞周期阻滞抑制人肝癌细胞系MHCC97H的生长。
3.3 抗氧化作用
蝉花多糖具有较好的抗氧化能力,是一种良好的天然抗氧化剂。陈安徽等[56]研究结果表明,蝉拟青霉P3菌丝体和发酵液的甲醇提取物具有较强的清除自由基活性和抑菌活性的能力,5.0 mg/mL菌丝体和发酵液提取物对0.4 mg/mL的DPPH自由基的清除率可达55.52%和74.86%,抑菌(白色假丝酵母菌)圈直径可达11.23和21.42 mm。ZHANG等[57]研究发现HEA能够通过减少活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)生成、氧化应激和保护线粒体抗氧化作用来减轻H2O2诱导的PC12细胞死亡。TANG等[34]从蝉花中分离的多酚对DNA氧化损伤具有良好的抑制作用。王惠等[58]通过超高效液相色谱建立蝉花不同部分与抗氧化、抗菌的谱效关系。
3.4 镇静镇痛作用
蝉花在《太平惠民合剂局方》中记载其具有镇静、镇痛的作用,现代研究表明蝉花中具有镇痛作用的物质为HEA。朱碧纯等[59]通过研究HEA对戊四唑诱导的小鼠惊厥模型的影响,发现HEA能够显著延长惊厥小鼠的存活时间和降低死亡率,具有抗惊厥作用。朱伟坚等[60]研究发现HEA的镇痛作用可能是通过激活腺苷A1R、下调A2AR及调控一系列疼痛相关基因发挥镇痛作用。
3.5 保护肾脏的作用
蝉花自古以来被广泛用于治疗慢性肾病,龙华医院利用蝉花开发“金蝉补肾汤”已用于治疗慢性肾功能衰竭[61],同时蝉花对于治疗肾病中末端的高血压性肾损伤也有效果。WANG等[62]通过评价HEA对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的肾脏保护能力,发现HEA通过降低高血糖诱导的氧化应激而显示出肾脏保护和抗炎的作用,未来可作为一种潜在的治疗剂,用于糖尿病并发症的治疗。ZHU等[63]研究表明蝉花中过氧化麦角甾醇可作为一种潜在的治疗肾脏纤维化的治疗药物。DENG等[64]研究蝉花菌丝体水提物(water extract,WCC)和醇提物(ethanol extract, ECC)对急性肾损伤的作用,发现WCC对肾损伤的作用优于ECC,WCC通过抑制氧化损伤和炎症因子反应起作用。
3.6 其他作用
蝉花中的HEA是一种Ca2+拮抗剂,具有显著降血压效果,降血压机制可能是HEA激活腺苷A1受体;HEA具有抗炎的作用,是蝉花中抗炎成分,其抗炎机制为通过抑制toll样受体4介导的核因子-κB(NF-κB)信号通路来减弱LPS 诱导的促炎反应[19];蝉花多糖具有抗衰老的作用,能够显著延长果蝇寿命,未来可作为一种新的抗衰老的药食补充剂;蝉花子实体具有促进肠道健康的潜在作用,口服蝉花子实体可预防三硝基苯磺酸(trinitrobrnzen sulfonic acid,TNBS)诱导克罗恩病小鼠的肠纤维化[65]。蝉花中的腺苷在治疗和预防神经退行性疾病方面具有潜在的治疗作用[66]。此外,蝉拟青霉还有望作为一种生防用菌,HEA可作为一种环境安全的杀虫剂[67]。
4 组学进展
截至目前,Genbank数据库中已公布了蝉花3个菌株的基因组测序结果,最早是2016年浙江泛亚生物医药的蝉花菌株BA-001的基因组测序结果(登录号GCA_001644785.1),其菌株基因组全长34.52 Mb,基因组覆盖度为28×,GC含量52.5%[68]。2018年中国科学院植物生理生态研究所王成树团队提交蝉花菌株CC02基因组数据(登录号GCA_002968875.1),其基因组全长为34.11 Mb,基因组覆盖度为80×,GC含量53.0%,含有9 701个蛋白编码基因[69]。2020年安徽农业大学对蝉花菌株ZJ1611进行了基因组测序(登录号:GCA_010211705.1),其全长为33.8 Mb,基因组覆盖度为233×,GC含量为53.1%,含有11 106个蛋白编码基因[70]。LU等[69]通过基因组和比较基因组分析发现蝉花编码的蛋白家族属于典型的虫生真菌蛋白,包括侵染寄主的蛋白酶和几丁质酶等,并发现蝉花无性子实体的产生与交配型(mating-type,MAT)位点控制无关。线粒体基因组作为研究物种起源和进化的有力工具,FAN等[71]测定蝉花3个菌株CCAD02、ARSEF11726和BA-001的线粒体基因组,其线粒体基因组总长分别为56 581、49 138和约56 080 bp, 都含有2个核糖体RNA和25个转运RNA,内含子数量分别为25、19和25,内含子数量的差异是导致线粒体基因组长度差异的原因;通过种间分析确定蝉花的分类位置,从系统发育树上揭示了蝉花与蛹虫草亲缘关系相近。
图1 蝉花生物活性作用
Fig.1 The biological activities in Chanhua
注:图中图片来源于网络。
代谢组学采用气相色谱质谱联用、高效液相色谱质谱联用、核磁共振等技术及数据分析处理方法,分析由于生物或非生物因素导致的样品中小分子代谢物质成分变化。近年来,代谢组学在蝉花中的应用主要集中在分析不同部分、不同培养时间或不同产地的代谢成分变化。如HE等[38]对野生蝉花、人工柞蚕蛹培养和人工固体培养基的蝉花菌丝体的代谢组学分析发现在野生虫草和人工柞蚕蛹培养蝉花的虫体部分存在着高水平的非核糖体多肽(nonribosomal peptides,NRPs),鞘脂类的水平在野生蝉花和人工柞蚕蛹培养的蝉花无论是在虫体部分还是在孢梗束部分都高于蝉花菌丝体,除了NRPs和鞘脂外,虫体部分含量较高的还有红土霉素、茴香霉素、链霉胺酮和乌司他洛辛。孢梗束和菌丝体部分含量较高的为生育酚、3′-脱氧花青素、γ-氨基丁酸和磷脂等有益的物质[38]。张万存等[36]对不同培养时间下蝉花菌丝体代谢组分析发现,随着培养时间不同代谢物具有显著变化,培养前期产生较多的细胞松弛素E、肌醇、γ-氨基丁酸、乙酰肉碱和亚油酸等与侵染宿主、早期信号传导和氧化供能有关的物质;中期产生较多的甘露醇、海藻糖、亚麻酸、柠檬酸、丙酮酸和7,8-二羟基油酸等与抗逆和氧化供能有关的物质,此外红酵母红素、δ-氨基-γ-酮戊酸2种抗生素含量也达到了最大值;培养后期产生较多的脯氨酸、2,4-二氨基丁酸、3′-deoxy-hanasanagin、ulvaline、赤霉素和烟酰胺等与抗逆、抗氧化、产孢和细胞保护有关的物质。何亚琼等[37]对人工培养柞蚕蝉花的不同部分代谢组学分析表明,不同部位的代谢物显著不同,蝉花虫体体内物质以大分子储藏物质为主,虫体表面菌丝中有大量次生代谢产物,孢梗束的次生代谢产物相对较少。
转录组学技术是寻找功能基因,揭示天然活性化合物生物合成及调控机理的重要工具。目前利用转录组学技术在阐明蝉花的活性物质如虫草素、麦角甾醇等的生物合成、揭示活性物质的作用机理等方面均有报道。LIU等[72]通过转录组学技术挖掘蝉花中与虫草素合成相关的候选基因,并发现5′-核苷酸酶和腺苷脱氨酶参与虫草素的合成。SU等[73]通过转录组揭示了蝉花中作为氮源的尿素增加麦角甾醇合成的调节机理。朱伟坚等[60]通过转录组揭示了蝉花中HEA是通过激活腺苷A1R,下调A2AR及调控一系列疼痛相关基因发挥其镇痛作用。
蛋白质组学作为后基因时代的标志之一,是药物发现及开发、寻找靶标蛋白等的有效途径。目前关于蝉花的蛋白质组学的文献报道较少。WANG等[55]通过蛋白质组学和飞行时间质谱分析研究蝉花对肝细胞抗癌机制,发现蝉花水体物通过G2/M细胞周期阻滞抑制人肝癌细胞系MHCC97H的生长。
5 前景与展望
蝉花、冬虫夏草、蛹虫草是我国虫草类真菌的主要代表物种,其中蝉花的活性成分与我国名贵虫草——冬虫夏草相似,有望作为冬虫夏草的替代品,市场前景广阔,且蝉花部分产品已经实现了商品化。2021年,随着蝉花人工栽培子实体批准为新食品原料,使得蝉花的应用范围进一步扩大,且随着蝉花中活性物质成分多糖、HEA、麦角甾醇、多球壳菌素等功能活性的探明、分离提取纯化工艺等的完善,蝉花的应用价值及商业化应用将会进一步扩大,市场需求也将会急剧增加。面对这一现状,在已有的研究基础上,未来应加强蝉花的人工培养技术研究,形成产业化、规模化蝉花的替代寄主昆虫人工培养方式,进一步加强固体培养技术和液体发酵培养技术;加快蝉花质量标准的制定,如活性物质的检测方法、含量的标准;加快蝉花专利的申请,为蝉花的规范化、产业化、市场化应用提供支撑;对具有生理活性的物质成分应加强分离纯化及生物安全性评估,为其应用开发奠定基础;同时应加强、加深蝉花生物活性机理的研究,蝉拟青霉菌株资源的收集、评价、鉴定及采用分子生物学技术等手段对菌株进行改造等基础研究工作,为蝉花在食品、药品、化妆品等多领域的开发应用提供研究基础和科学依据。
[1] 黄年来, 林志彬, 陈国良, 等.中国食药用菌学[M].上海:上海科学技术文献出版, 2010:1475-1483.
HUANG N L, LIN Z B, CHEN G L, et al.Medicinal and edible fungi[M].Shanghai.Shanghai Scientific and Technological Literature Press, 2010:1475-1483.
[2] 戴玉成,图力吉尔, 崔宝凯.中国药用真菌图志[M].哈尔滨:东北林业大学出版社, 2013:370-371.
DAI Y C, BAU TOLGOR, CUI B K, et al.Illustrations of medicinal fungi in China[M].Harbin:Northeast Forestry University Press, 2013:370-371.
[3] 罗信昌, 陈士瑜.中国菇业大典[M].北京:清华大学出版社, 2016:1545-1552.
LUO X C, CHEN S Y.Collection of mushroom industry in China[M].Beijing:Tsinghua University Press, 2016:1545-1552.
[4] 温鲁, 唐玉玲, 张平.蝉花与有关虫草活性成分检测比较[J].江苏中医药, 2006, 38(1):45-46.
WEN L, TANG Y L, ZHANG P.Detection and comparison of active components between cicada flower and related cordyceps sinensis[J].Jiangsu Journal of Traditional Chinese Medicine, 2006, 38(1):45-46.
[5] NXUMALO W, ELATEEQ A A, SUN Y F.Can Cordyceps cicadae be used as an alternative to Cordyceps militaris and Cordyceps sinensis? —A review[J].Journal of Ethnopharmacology, 2020, 257:112879.
[6] 于士军, 纪伟, 董建飞, 等.不同蝉花产品蛋白质营养价值分析[J].氨基酸和生物资源, 2014, 36(4):35-39.
YU S J, JI W, DONG J F, et al.Nutritional value assessment of protein in different Isaria cicadae products[J].Amino Acids &Biotic Resources, 2014, 36(4):35-39.
[7] 于士军, 何玲艳, 程铭, 等.硒对蝉花孢梗束营养和功能成分的影响[J].浙江农业学报, 2021, 33(12):2245-2253.
YU S J, HE L Y, CHENG M, et al.Effect of selenium on nutritional and functional components of synnemata of Isaria cicadae[J].Acta Agriculturae Zhejiangensis, 2021, 33(12):2245-2253.
[8] 葛飞, 夏成润, 李春如, 等.蝉拟青霉菌丝体与天然蝉花中化学成分的比较分析[J].菌物学报, 2007, 26(1):68-75.
GE F, XIA C R, LI C R, et al.Analysis of the chemical compositions of Paecilomyces cicadae fermented mycelia and Cordyceps cicadae fruit body[J].Mycosystema, 2007, 26(1):68-75.
[9] 卞智慧, 于瑞莲, 魏思敏, 等.蝉花、蛹虫草和冬虫夏草药材中脂肪酸含量的比较研究[J].中国药房, 2017, 28(30):4252-4256.
BIAN Z H, YU R L, WEI S M, et al.Comparative study on the contents of fatty acids in Isaria cicadae, Cordyceps militaris and Cordyceps sinensis[J].China Pharmacy, 2017, 28(30):4252-4256.
[10] 张红霞, 高新华, 陈伟, 等.人工培育蝉花与天然蝉花中化学成分的比较[J].食用菌学报, 2012, 19(3):59-62.
ZHANG H X, GAO X H, CHEN W, et al.Levels of selected chemical components in Cordyceps sobolifera fruit bodies cultivated artificially and collected from the wild[J].Acta Edulis Fungi, 2012, 19(3):59-62.
[11] FUJITA T, INOUE K, YAMAMOTO S, et al.A potent immunosuppressive activity found in Isaria sinclairii metabolite[J].The Journal of Antibiotics, 1994, 47(2):208-215.
[12] ZÉCRI F J.From natural product to the first oral treatment for multiple sclerosis:The discovery of FTY720 (gilenyaTM)?[J].Current Opinion in Chemical Biology, 2016, 32:60-66.
[13] YU J W, XU H J, MO Z H, et al.Determination of myriocin in natural and cultured Cordyceps cicadae using 9-fluorenylmethyl chloroformate derivatization and high-performance liquid chromatography with UV-detection[J].Analytical Sciences, 2009, 25(7):855-859.
[14] ZENG W B, YU H, GE F, et al.Distribution of nucleosides in populations of Cordyceps cicadae[J].Molecules, 2014, 19(5):6123-6141.
[15] 葛琦, 万晶琼, 朱益灵, 等.金蝉花核苷类成分的LC-MS定性分析与HPLC含量测定[J].天然产物研究与开发, 2019, 31(11):1857-1863;1927.
GE Q, WAN J Q, ZHU Y L, et al.Qualitative and quantitative analysis of nucleoside components in Cordyceps cicadae by LC-MS and HPLC[J].Natural Product Research and Development, 2019, 31(11):1857-1863;1927.
[16] 李瑞雪, 胡飞, 陈安徽, 等.蝉拟青霉高产虫草素菌株液体培养工艺的研究[J].徐州工程学院学报, 2007, 22(10):23-30.
LI R X, HU F, CHEN A H, et al.Studies on liquid culture technology of cordycepin in Paecilomyces cicadae[J].Xuzhou Institute of Technology, 2007, 22(10):23-30.
[17] 张洪梅, 史晓飒, 刘腾飞, 等.不同产地蝉花中腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量比较[J].环球中医药, 2017, 10(3):297-301.
ZHANG H M, SHI X S, LIU T F, et al.Comparing research on contents of adenosine, cordycepin and ergosterol in cordyceps cicadae[J].Global Traditional Chinese Medicine, 2017, 10(3):297-301.
[18] LU M Y, CHEN C C, LEE L Y, et al.N6-(2-hydroxyethyl)adenosine in the medicinal mushroom Cordyceps cicadae attenuates lipopolysaccharide-stimulated pro-inflammatory responses by suppressing TLR4-mediated NF-κB signaling pathways[J].Journal of Natural Products, 2015, 78(10):2452-2460.
[19] 刘宽博, 王芬, 柴一秋, 等.广义虫草类真菌来源的N6-(2-羟乙基)腺苷的研究开发现状与思考[J].菌物学报, 2017, 36(1):6-13.
LIU K B, WANG F, CHAI Y Q, et al.Research and exploitation of N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine from Cordyceps s.l.:Progress and problems[J].Mycosystema, 2017, 36(1):6-13.
[20] FURUYA T, HIROTANI M, MATSUZAWA M.N6-(2-hydroxyethyl)adenosine, a biologically active compound from cultured mycelia of Cordyceps and Isaria species[J].Phytochemistry, 1983, 22(11):2509-2512.
[21] 雷帮星, 康冀川, 何劲, 等.一株蝉拟青霉产N6-(2-羟乙基)腺苷静置发酵条件的研究[J].菌物学报, 2017, 36(10):1415-1426.
LEI B X, KANG J C, HE J, et al.Static liquid fermentative conditions for producing N6-(2-hydroxyethyl) adenosine of Paecilomyces cicadae[J].Mycosystema, 2017, 36(10):1415-1426.
[22] 厉晓腊. 蝉拟青霉液体深层发酵技术研究[D].南京:南京农业大学, 2011.
LI X L.Study on submerged fermentation technology of Paecilomyces cicadae[D].Nanjing:Nanjing Agricultural University, 2011.
[23] 程洋洋, 惠靖茹, 郝竞霄, 等.食用菌中麦角甾醇的研究进展[J].食品工业科技, 2021, 42(10):349-354.
CHENG Y Y, HUI J R, HAO J X, et al.Research progress of ergosterol in edible fungi[J].Science and Technology of Food Industry, 2021, 42(10):349-354.
[24] SHI F H, HE L F, QIAN J Y, et al.Optimization of the nutritional constituents for ergosterol peroxide production by Paecilomyces cicadae based on the uniform design and mathematical model[J].Scientific Reports, 2022, 12:5853.
[25] KUO Y C, WENG S C, CHOU C J, et al.Activation and proliferation signals in primary human T lymphocytes inhibited by ergosterol peroxide isolated from Cordyceps cicadae[J].British Journal of Pharmacology, 2003, 140(5):895-906.
[26] UKAI S, MATSUURA S, HARA C, et al.Structure of a new galactomannan from the ascocarps of Cordyceps cicadae shing[J].Carbohydrate Research, 1982, 101(1):109-116.
[27] KIHO T, MIYAMOTO I, NAGAI K, et al.Minor, protein-containing galactomannans from the insect-body portion of the fungal preparation Chan Hua (Cordyceps cicadae)[J].Carbohydrate Research, 1988, 181:207-215.
[28] WEI C Y, LI W Q, SHAO S S, et al.Structure and chain conformation of a neutral intracellular heteropolysaccharide from mycelium of Paecilomyces cicadae[J].Carbohydrate Polymers, 2016, 136:728-737.
[29] 谭艾娟, 武立琨, 余晓蓓.蝉拟青霉产透明质酸最佳液体培养基的筛选[J].食品科学, 2007, 28(8):294-296.
TAN A J, WU L K, YU X B.Screen of optimum broth of Paecilomyces cicadae for producing hyaluronic acid[J].Food Science, 2007, 28(8):294-296.
[30] SHI C E, SONG W L, GAO J, et al.Enhanced production of cordycepic acid from Cordyceps cicadae isolated from a wild environment[J].Brazilian Journal of Microbiology, 2022, 53(2):673-688.
[31] 覃丽霞, 王玉芹, 李春如, 等.蝉棒束孢菌孢梗束培植过程中主要成分含量的变化规律及其复方对小鼠睡眠的影响[J].菌物学报, 2020, 39(2):362-371.
QIN L X, WANG Y Q, LI C R, et al.The content of main chemical constituents of coremium in different cultivation period of Isaria cicadae and the effects of compound prescription containing I.cicadae coremium on improving sleep of mice[J].Mycosystema, 2020, 39(2):362-371.
[32] 李康乐, 包佳源, 陆瑞利, 等.SDE-GC-MS法分析三种虫生真菌菌丝中挥发性成分[J].菌物学报, 2012, 31(1):92-101.
LI K L, BAO J Y, LU R L, et al.Analysis of volatile components of three entomogenous fungi by SDE-GC-MS[J].Mycosystema, 2012, 31(1):92-101.
[33] ZHANG S W, XUAN L J.Cyclopentenone and furan derivative from the mycelia of Cordyceps cicadae[J].The Journal of Antibiotics, 2008, 61(1):43-45.
[34] TANG Z Z, LIN W J, YANG J, et al.Ultrasound-assisted extraction of Cordyceps cicadae polyphenols:Optimization, LC-MS characterization, antioxidant and DNA damage protection activity evaluation[J].Arabian Journal of Chemistry, 2022, 15(8):103953.
[35] 巨凤, 郭文秀, 陈瑶, 等.蝉花的化学成分[J].应用与环境生物学报, 2022, 28(3):638-644.
JU F, GUO W X, CHEN Y, et al.Chemical constituents of the fungus Cordyceps cicadae[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology, 2022, 28(3):638-644.
[36] 张万存, 陈龙云, 高沙, 等.不同培养时间下蝉棒束孢菌丝体的代谢组研究[J].菌物学报, 2015, 34(2):252-268.
ZHANG W C, CHEN L Y, GAO S, et al.Metabolomic analysis of the mycelia of Isaria cicadae at different incubation time[J].Mycosystema, 2015, 34(2):252-268.
[37] 何亚琼, 彭凡, 赵铖, 等.人工培养柞蚕蝉花不同部位的代谢组差异[J].微生物学通报, 2021, 48(2):480-492.
HE Y Q, PENG F, ZHAO C, et al.Metabolomic differences among different parts of Isaria cicadae cultured on Antheraea pernyi[J].Microbiology China, 2021, 48(2):480-492.
[38] HE Y Q, ZHANG W C, PENG F, et al.Metabolomic variation in wild and cultured cordyceps and mycelia of Isaria cicadae[J].Biomedical Chromatography, 2019, 33(4):4478.
[39] 胡海燕, 邹晓, 罗力, 等.传统中药蝉花的活体家蚕人工培养[J].中国中药杂志, 2009, 34(17):2140-2143.
HU H Y, ZOU X, LUO L, et al.Artificial culturing of Cordyceps cicadidae on living silkworm[J].China Journal of Chinese Materia Medica, 2009, 34(17):2140-2143.
[40] 李忠, 金道超, 邹晓, 等.蝉拟青霉菌丝对不同碳氮源利用的研究[J].安徽农业科学, 2007, 35(18):5517-5518.
LI Z, JIN D C, ZOU X, et al.Study on utilization of different carbon and nitrogen sources by Paecilomyces cicadae silk[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2007, 35(18):5517-5518.
[41] 谢春芹, 凡军民, 许俊齐, 等.不同营养条件对野生蝉花人工固体栽培的影响[J].山东农业大学学报(自然科学版), 2018, 49(3):477-483.
XIE C Q, FAN J M, XU J Q, et al.Effects of different nutritional conditions on artificial solid cultivation of wild Cordyceps cicadae[J].Journal of Shandong Agricultural University (Natural Science Edition), 2018, 49(3):477-483.
[42] 张忠亮, 陈桃宝, 尹彬, 等.不同培养基对蝉花培养物核苷类成分的影响[J].药物评价研究, 2016, 39(5):797-805.
ZHANG Z L, CHEN T B, YIN B, et al.Effect of different culture medium on nucleoside component content in culture of Cordyceps cicadae[J].Drug Evaluation Research, 2016, 39(5):797-805.
[43] 王琪, 刘作易.蝉拟青霉多糖反馈抑制的初步研究[J].贵州农业科学, 2008, 36(2):74-75.
WANG Q, LIU Z Y.A preliminary study on feedback inhibition of polysaccharide in Paecilomyces cicadae[J].Guizhou Agricultural Sciences, 2008, 36(2):74-75.
[44] 李忠, 刘爱英, 金道超.蝉拟青霉深层发酵的研究[J].河北大学学报(自然科学版), 2010, 30(6):682-687.
LI Z, LIU A Y, JIN D C.Study on submerged fermentation of Paecilomyces cicadae[J].Journal of Hebei University (Natural Science Edition), 2010, 30(6):682-687.
[45] 艾仁丽, 谭艾娟, 吕世明.蝉拟青霉液体培养条件优化[J].生物技术, 2020, 30(4):397-403.
AI R L, TAN A J, LV S M.Optimization of liquid culture conditions of Paecilomyces cicadae[J].Biotechnology, 2020, 30(4):397-403.
[46] SHARMA S K, GAUTAM N, ATRI N S.Optimized extraction, composition, antioxidant and antimicrobial activities of exo and intracellular polysaccharides from submerged culture of Cordyceps cicadae[J].BMC Complementary and Alternative Medicine, 2015, 15:446.
[47] CHENG J W, WANG Y B, HE L, et al.Optimization of fermentation process for the production of intracellular polysaccharide from Paecilomyces cicadae and the immuno-stimulating activity of intracellular polysaccharide[J].World Journal of Microbiology and Biotechnology, 2012, 28(12):3293-3299.
[48] 陈显群, 羊悦, 杨胜利.蝉花液体发酵产胞外多糖培养基优化研究[J].食用菌, 2015, 37(1):10-13.
CHEN X Q, YANG Y, YANG S L.Optimization of culture medium for extracellular polysaccharide production by liquid fermentation of cicada flower[J].Edible Fungi, 2015, 37(1):10-13.
[49] 黄小忠, 谢春芹, 张雪松, 等.蝉花真菌液体发酵及活性成分测定[J].江苏农业科学, 2020, 48(2):197-201.
HUANG X Z, XIE C Q, ZHANG X S, et al.Liquid fermentation of cicada fungus and determination of active components[J].Jiangsu Agricultural Sciences, 2020, 48(2):197-201.
[50] 罗钰嘉, 陈波利, 谭艾娟, 等.蝉拟青霉产镇痛组分的培养条件优化[J].生物技术, 2021, 31(4):377-384.
LUO Y J, CHEN B L, TAN A J, et al.Optimization of culture conditions for analgesic components produced by Paecilomyces cicadae[J].Biotechnology, 2021, 31(4):377-384.
[51] 金丽琴, 吕建新, 杨介钻, 等.蝉拟青霉总多糖对免疫抑制大鼠组织器官免疫功能调节的实验研究[J].中国病理生理杂志, 2006, 22(5):881-884.
JIN L Q, LV J X, YANG J Z, et al. Paecilomyces cicadida total polysaccharides regulates immune function in immunosuppressed rats[J].Chinese Journal of Pathophysiology, 2006, 22(5):881-884.
[52] KIM H S, KIM Y J, LEE H K, et al.Activation of macrophages by polysaccharide isolated from Paecilomyces cicadae through toll-like receptor 4[J].Food and Chemical Toxicology, 2012, 50(9):3190-3197.
[53] 金丽琴, 熊中奎, 吕建新.蝉拟青霉多糖免疫调节和抗肿瘤活性的实验研究[J].中国病理生理杂志, 2008, 24(3):494-497.
JIN L Q, XIONG Z K, LÜ J X.Experimental studies on immunomodulatory and antitumor activity of polysaccharide from Paecilomyces cicadidae[J].Chinese Journal of Pathophysiology, 2008, 24(3):494-497.
[54] XIE H Q, LI X T, CHEN Y J, et al.Ethanolic extract of Cordyceps cicadae exerts antitumor effect on human gastric cancer SGC-7901 cells by inducing apoptosis, cell cycle arrest and endoplasmic reticulum stress[J].Journal of Ethnopharmacology, 2019, 231:230-240.
[55] WANG H L, ZHANG J, SIT W H, et al.Cordyceps cicadae induces G2/M cell cycle arrest in MHCC97H human hepatocellular carcinoma cells:A proteomic study[J].Chinese Medicine, 2014, 9:15.
[56] 陈安徽, 李春如, 樊美珍.蝉拟青霉代谢产物清除DPPH自由基和抗真菌活性的研究[J].菌物学报, 2008, 27(3):405-412.
CHEN A H, LI C R, FAN M.Scavenging and anti-fungal activities of the metabolite of Paecilomyces cicadae[J].Mycosystema, 2008, 27(3):405-412.
[57] ZHANG L G, WU T, OLATUNJI O J, et al.N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine from Cordyceps cicadae attenuates hydrogen peroxide induced oxidative toxicity in PC12 cells[J].Metabolic Brain Disease, 2019, 34(5):1325-1334.
[58] 王惠, 陈康, 郝雯雯, 等.蝉花抑菌抗氧化谱效关系的初步研究[J].食品与生物技术学报, 2022, 41(5):56-65.
WANG H, CHEN K, HAO W W, et al.Preliminary study on relationship between antimicrobial and antioxidant spectra of Isaria cicadae miquel[J].Journal of Food Science and Biotechnology, 2022, 41(5):56-65.
[59] 朱碧纯, 柴一秋, 章思思, 等.蝉花虫草活性成分的抗惊厥作用[J].菌物学报, 2016, 35(5):619-627.
ZHU B C, CHAI Y Q, ZHANG S S, et al.Effects of active components from Ophiocordyceps sobolifera on anticonvulsions[J].Mycosystema, 2016, 35(5):619-627.
[60] 朱伟坚, 柴一秋, 金轶伟, 等.蝉花虫草镇痛化合物对痛风大鼠转录组及Adora1等疼痛相关基因的影响[J].菌物学报, 2017, 36(1):48-59.
ZHU W J, CHAI Y Q, JIN Y W, et al.Effects of antinocieptive compound from Ophiocordyceps sobolifera on the transcriptome and Adora1 etc.pain-related genes in gouty rats[J].Mycosystema, 2017, 36(1):48-59.
[61] 解思友, 李春如, 龙文君, 等.蝉花肾损伤保护作用的药理及临床研究进展[J].药物评价研究, 2020, 43(4):630-635.
XIE S Y, LI C R, LONG W J, et al.Pharmacological and clinical research progress of Cicada flower in protecting kidney injury[J].Drug Evaluation Research, 2020, 43(4):630-635.
[62] WANG X H, QIN A Q, XIAO F, et al.N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine from Cordyceps cicadae protects against diabetic kidney disease via alleviation of oxidative stress and inflammation[J].Journal of Food Biochemistry, 2019, 43(2):e12727.
[63] ZHU Y L, YU X F, GE Q, et al.Antioxidant and anti-aging activities of polysaccharides from Cordyceps cicadae[J].International Journal of Biological Macromolecules, 2020, 157:394-400.
[64] DENG J S, JIANG W P, CHEN C C, et al.Cordyceps cicadae mycelia ameliorate cisplatin-induced acute kidney injury by suppressing the TLR4/NF-κB/MAPK and activating the HO-1/Nrf2 and sirt-1/AMPK pathways in mice[J].Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020, 2020:1-17.
[65] ZHU R, ZHENG R, DENG Y Y, et al.Ergosterol peroxide from Cordyceps cicadae ameliorates TGF-β1-induced activation of kidney fibroblasts[J].Phytomedicine, 2014, 21(3):372-378.
[66] OLATUNJI O J, FENG Y, OLATUNJI O O, et al.Neuroprotective effects of adenosine isolated from Cordyceps cicadae against oxidative and ER stress damages induced by glutamate in PC12 cells[J].Environmental Toxicology and Pharmacology, 2016, 44:53-61.
[67] FANG M, CHAI Y Q, CHEN G, et al.N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine exhibits insecticidal activity against Plutella xylostella via adenosine receptors[J].PLoS One, 2016, 11(9):e0162859.
[68] 李增智, 栾丰刚, HYWEL-JONES Nigel L, 等.与蝉花有关的虫草菌生物多样性的研究Ⅱ:重要药用真菌蝉花有性型的发现及命名[J].菌物学报, 2021, 40(1):95-107.
LI Z Z, LUAN F G, HYWELJONES N, et al.Biodiversity of cordycipitoid fungi associated with Isaria cicadae Miquel Ⅱ:Teleomorph discovery and nomenclature of Chanhua, an important medicinal fungus in China[J].Mycosystema, 2021, 40(1):95-107.
[69] LU Y Z, LUO F F, CEN K, et al.Omics data reveal the unusual asexual-fruiting nature and secondary metabolic potentials of the medicinal fungus Cordyceps cicadae[J].BMC Genomics, 2017, 18(1):1-15.
[70] PENG Y, WANG L F, GAO Y, et al.Identification and characterization of the glycoside hydrolase family 18 genes from the entomopathogenic fungus Isaria cicadae genome[J].Canadian Journal of Microbiology, 2020, 66(4):274-287.
[71] FAN W W, ZHANG S, ZHANG Y J.The complete mitochondrial genome of the Chan-Hua fungus Isaria cicadae:A tale of intron evolution in Cordycipitaceae[J].Environmental Microbiology, 2019, 21(2):864-879.
[72] LIU T F, LIU Z Y, YAO X, et al.Identification of cordycepin biosynthesis-related genes through de novo transcriptome assembly and analysis in Cordyceps cicadae[J].Royal Society Open Science, 2018, 5(12):181247.
[73] SU Q H, ZHANG Z C, LIU X C, et al.The transcriptome analysis on urea response mechanism in the process of ergosterol synthesis by Cordyceps cicadae[J].Scientific Reports, 2021, 11(1):10927.