在人体内,肝脏负责大约90%的酒精(乙醇)代谢。这个过程先后经过两种酶:乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)和乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)。首先乙醇在ADH的作用下被氧化为乙醛和活性氧(reactive oxygen species,ROS),然后乙醛在ALDH的作用下进一步被氧化为乙酸(醋酸)。随后参与三羧酸循环,进一步被氧化以生成CO2和水,同时也产生了对人体各种生命活动必需的能量。尽管这个过程能有效地清除体内的乙醇,但过度或频繁的饮酒会产生大量内源性醛类物质。这些高度反应性的化合物能与DNA反应,可能引发DNA损伤和突变,从而可能导致一系列肝脏疾病,如肝脏脂肪变性、肝炎、肝硬化和肝癌。因此,适量饮酒和保持健康的生活习惯至关重要。当DNA受到醛类物质的损伤时,细胞会启动DNA交联修复和同源重组修复两种机制。DNA交联修复作为一种生物防御机制,可以防止乙醛诱发的细胞损伤。然而,当这个修复机制受到破坏时,就可能导致范可尼贫血(fanconi anemia,FA)。FA途径与乙醛解毒功能的失活可能会诱导突变,从而加速恶性肿瘤的发展[1]。不过,同源重组修复能为FA的DNA交联修复提供额外的乙醛抵抗能力[2]。
白酒中含有多种活性成分,这些成分有助于减轻酒精带来的伤害、增强人体的防御能力,这些活性成分包括多酚、酸类、吡嗪类、含硫化合物、萜烯类、酯类、呋喃类以及肽类等[3]。这些成分具有多种生物活性功能,如促进乙醇的代谢、提高饮酒后的舒适感、具有抑菌和杀菌作用、抗氧化、抗炎、抗癌[4]、预防和治疗心血管疾病等。在这一系列的活性成分中,阿魏酸作为其中之一,在白酒中的含量在0.21～6.50 μg/L[5]。
QI等[6]研究了乙醇处理的LO2肝细胞模型,发现姜黄酚可以通过阻断是微管关联蛋白1轻链3B(Microtubule-Associated Protein 1 Light Chain 3B,LC3B)与层粘连蛋白B1的相互作用来抑制肝细胞衰老。XIE等[7]研究了旋覆花次内酯(1-O-Acetylbritannilactone,ABL)对酒精诱发的人类正常肝细胞(LO2细胞)损伤的保护效果,并探究了其潜在机制。研究发现ABL能够通过调节ROS/Akt/NF-κB信号通路,来减少炎症和细胞凋亡,从而改善酒精诱导的肝毒性。任思思等[8]研究了太白楤木总皂苷(total saponins of aralia taibaiensis,TSAT)能够有效修复H2O2引起的LO2肝细胞损伤。他们证实了TSAT通过提高抗氧化酶水平、降低细胞凋亡率,从而保护细胞免受氧化应激损害。王妍凌等[9]研究了新疆葡萄酒中的酚类物质可以促进LO2细胞的自噬活性。研究使用了免疫印迹和流式细胞术等方法,初步评估了橙皮苷和表儿茶素没食子酸酯对LO2细胞自噬的潜在促进作用。
阿魏酸是一种常见的高效抗氧化天然化合物,广泛存在于各类植物中。它能够中和体内有害的自由基,从而抵御由氧化应激引起的细胞损伤和多种健康问题[10]。除此之外,阿魏酸还展现出多种生理活性,包括但不限于抗炎、抗肿瘤、抗糖尿病以及抗菌作用[11]。阿魏酸的抗癌潜力也引人注目,特别是其可以通过激活细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)和应激活化蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化,增强凋亡途径中的关键蛋白B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,BCL-2)和Bcl-2相关X蛋白(BCL2-Associated X,BAX),抑制CT26细胞的增殖并诱导凋亡[12]。此外,阿魏酸还被认为有助于维护心血管系统健康,可能有助于预防和治疗诸如高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病[13]。
流式细胞术是一种高效、快速且定量的技术,能实现对活细胞的精确分析,产生可靠且可重复的结果。在肝脏受损的情况下,活性氧的生成通常会增加,这种变化可以通过流式细胞术进行监测。利用特定的荧光探针,例如2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate dye,DCFDA),可以对细胞内ROS的生成进行定性和定量评估[14]。此外,流式细胞术也可用于评估受损肝细胞的细胞周期状态,以此来判断肝细胞的再生能力和损伤程度。通过使用DNA染料,可以对细胞在G1、S和G2期的分布进行深入研究[15]。不仅如此,流式细胞术还可以检测和定量肝损伤中的细胞凋亡和坏死。利用Annexin V和PI染料或Hoechst染料,可以同时检测早期和晚期(或坏死)的凋亡细胞[16]。这些优势使流式细胞术成为一种可靠的工具,有助于研究阿魏酸对肝损伤的影响,深化对肝细胞代谢调节、细胞器更新等生理过程的理解,以及这些过程在疾病发生和发展中的关键作用。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
阿魏酸,上海麦克林公司;RPMI-1640培养基,美国Gibco公司;胎牛血清、胰蛋白酶、链霉素、青霉素,美国Hyclone公司;DNA Labelling Solution、Cytognos、细胞周期试剂盒、ROS试剂盒、p-H2AX一抗蛋白、GAPDH蛋白,上海碧云天生物技术有限公司;LO2人源肝细胞,中国科学院上海细胞生物学研究所。
1.2 仪器与设备
YXQ-50G立式灭菌锅,上海博迅生物仪器股份有限公司;Spectra Max®i D3多功能酶标仪,美国Molecular Devices公司;MX-S可调式混匀仪、DLAB DM0506临床低速离心机,大龙兴创实验仪器(北京)股份公司;Chenmi Scope 6200 Touch化学发光成像系统,上海勤翔科学仪器有限公司;THUNDER Imager 3显微成像系统,德国Leica公司;LEGEND Micro 21R微量台式离心机,美国赛默飞公司;NovoCyte 2000R安捷伦流式细胞仪,安捷伦科技有限公司。
1.3 实验方法
1.3.1 细胞培养
LO2细胞被种植在RPMI-1640培养基中进行培养。为了创造最佳的生长条件,培养基中加入了10%(质量分数)胎牛血清,这是一种常见的细胞生长刺激剂。此外,为了防止可能的细胞污染,还加入了100 U/mL的青霉素和100 μg/mL的链霉素,这两种抗生素可以抑制不良微生物的生长。所有这些步骤都在一个特定的环境中进行,即在37 ℃的温度和5%(体积分数)的CO2下,以模拟细胞的自然生长环境。当细胞生长到60%～80%的融合度时,使用0.25%(质量分数)胰蛋白酶进行消化,并传代。
1.3.2 CCK-8法
将2.0×104个/孔的LO2细胞接种在96孔板中,贴壁后加入不同浓度的阿魏酸培养基。经过处理后的细胞在培养基中孵育24 h,以评估其增殖能力。随后,用RPMI-1640培养基稀释CCK-8,使其浓度达到每孔10 μL。继续孵育2～3 h后,使用酶标仪测定吸光度值,波长为450 nm,以计算细胞的存活率。
1.3.3 乙醇对肝细胞的DNA损伤模型构建
将1.0×105个/孔的LO2细胞在6孔板中培养24 h。同时,用RPMI-1640培养基稀释95%(质量分数)的食用酒精,制备400、600和800 mmol/L的溶液,并对细胞进行6 h处理。这些不同浓度的选择旨在研究酒精浓度对LO2细胞成长和生存的影响。
1.3.4 阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤后细胞周期的影响
接种1.0×105个/孔的LO2细胞在6孔板中,培养24 h。然后用400 mmol/L酒精处理细胞6 h,更换液体后,用阿魏酸处理24 h。先PBS清洗3次,接着用0.25%(质量分数)胰蛋白酶消化并收集细胞,再用PBS洗1次,加入DNA染色剂染色避光孵育20～30 min后,上流式细胞仪分析。
1.3.5 Western blot 检测蛋白表达情况
接种1.0×105个/孔的LO2细胞在6孔板中,培养24 h。然后用400 mmol/L酒精处理细胞6 h,更换液体后,用阿魏酸处理24 h。接下来,用预冷的PBS清洗细胞3次,然后用含有磷酸蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液裂解细胞。裂解后的细胞在4 ℃下,通过12 000×g的离心力离心15 min,然后取上清液。利用BCA蛋白质测定试剂盒测定蛋白质的浓度,并加入5×样品缓冲液稀释混匀。经过98 ℃的加热20 min后,在每块胶20 mA下进行SDS-PAGE电泳。电泳结束后,恒压120 V将蛋白质转移到PVDF膜上,然后在室温下使用配制好的封闭缓冲液摇晃封闭1 h。接着,在4 ℃下与抗兔p-H2AX一抗孵育过夜。第2天经过TBST清洗3次,每次5～10 min,再用辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗孵育40 min。再次经过TBST清洗3次,每次5～10 min后,加入显影液进行显色和拍照,使用Image J软件进行定量分析和比较。
1.3.6 阿魏酸对乙醇诱导ROS荧光强度变化的影响
接种1.0×105个/孔的LO2细胞在6孔板中,培养24 h。然后用400 mmol/L酒精处理细胞6 h,更换液体后,用阿魏酸处理24 h。再用探针标记20 min。先PBS清洗1次,接着用不含EDTA的0.25%(质量分数)胰蛋白酶消化并收集细胞,用PBS清洗3次,上流式细胞仪分析ROS荧光强度变化。
1.3.7 红绿双荧光蛋白检测阿魏酸对肝细胞细胞自噬的影响
先构建LO2细胞自噬通量探针模型。通过慢病毒介导的方法,将自噬荧光探针GFP-LC3-RFP-LC3ΔG转染至293T细胞,并收集病毒上清液。利用病毒感染LO2细胞,将荧光探针导入其中。该模型利用内源性蛋白酶(autophagy protein 4,ATG4)将自噬探针切割成等摩尔量的GFP-LC3和RFP-LC3ΔG。在自噬过程中,GFP-LC3与磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine,PE)结合被自噬体溶解,而RFP-LC3ΔG不能被脂化,稳定保留在细胞质中,作为内对照。通过计算绿色蛋白(green fluorescent proteins,GFP)/红色蛋白(red fluorescent proteins,RFP)信号比值,可以估计细胞自噬通量。接种1.0×105个/孔的含荧光探针LO2细胞在6孔板中,并用不同浓度的阿魏酸处理24 h。接着用0.25%(质量分数)胰蛋白酶消化并收集细胞,用PBS清洗1次,上流式细胞仪分析。
1.4 数据分析
在用Graphpad Prism 9.0软件分析数据时,进行方差分析。实验数据,所有来自于3次重复试验的平均值,以“平均值±标准误差”呈现。图表均由Adobe Illustrator制作。
2 结果与分析
2.1 CCK8法测阿魏酸对肝细胞存活率的影响
为探究阿魏酸对LO2肝细胞的影响作用,将不同浓度的阿魏酸0、0.5、1、2、4、8、16 mmol/L作用于LO2肝细胞,继续培养24 h后,加入稀释后的CCK-8作用2 h,通过酶标仪检测细胞的增殖活性,结果如图1所示。与空白组相比,阿魏酸作用于细胞后,随浓度的升高,细胞存活率先升后降。阿魏酸在浓度0.5、1 mmol/L下,细胞的增殖活性增加(P<0.01),表明阿魏酸在该浓度下对LO2肝细胞有增殖作用。在8、16 mmol/L,细胞存活率低于50%,显著降低(P<0.01)。在接下来的实验中,选择0～8 mmol/L下进行研究,以便更好地分析并理解其中的规律和趋势。
图1 不同浓度的阿魏酸对细胞活力的影响
Fig.1 Effects of ferulic acid at different concentrations on cell viability
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01(下同)。
2.2 乙醇对肝细胞的DNA损伤模型构建
细胞周期的运行遵循一套严谨的控制系统,确保每一步进程仅在前一步骤完成后启动。在G1期,细胞正在进行生长并准备进行DNA复制。细胞在S期和G2期进行DNA复制,并为接下来的分裂阶段做好准备。当细胞面临不利的环境条件,例如缺乏养分时,这套控制系统可以调节细胞周期的速度,甚至暂时停止细胞周期以赋予细胞应对挑战的时间和机会。特别是当细胞的DNA受到损伤时,这套控制机制的重要性更加突出,它会暂停细胞周期,允许DNA损伤修复系统介入,修复损坏的DNA,以确保细胞的正常运作和生存[17]。将LO2细胞经含不同浓度酒精(0、400、600、800 mmol/L)的培养基处理6 h。结果如图2所示。根据细胞周期图的研究结果,发现乙醇会导致LO2细胞在G1期的比例降低(P<0.05),而S期和G2期的比例则上升。这可能说明乙醇与DNA发生反应形成加合物,从而导致LO2细胞在S期和G2期产生阻滞。这种阻滞使细胞无法完成DNA的复制和分裂过程。这可能表明乙醇对细胞周期的影响可能是通过影响DNA的复制和分裂,从而改变细胞周期的分布。
a-LO2细胞经含不同浓度乙醇(0、400、600、800 mmol/L)的培养基处理6 h后对细胞周期的影响;b-在乙醇的影响下LO2细胞G1/(G1+S+G2)比值
图2 乙醇对肝细胞周期的影响
Fig.2 Effects of ethanol on liver cell cycle
2.3 阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤后细胞周期的影响
阿魏酸在人宫颈癌细胞中具有显著的抑制作用,可能通过抑制自噬和诱导细胞周期阻滞来发挥抗癌作用[18]。朱嘉欢等[19]对阿魏酸影响衰老造血干细胞增殖能力的研究,并通过观察细胞周期变化来探索阿魏酸的作用机制,发现阿魏酸能使G1期显著增加,S和G2期显著下降。将LO2细胞经浓度为400 mmol/L的酒精培养基处理6 h后,加入不同浓度(0、0.25、0.5、1、2、4 mmol/L)的阿魏酸培养基处理24 h。结果如图3所示,阿魏酸在浓度0.25 mmol/L下,G1期细胞比率上升不明显,在浓度为0.25、0.5、1、2 mmol/L的条件下,能够提高细胞G1期比率(P<0.01)。在4 mmol/L高浓度下,G1期显著降低(P<0.01),抑制DNA复制。
a-不同浓度的阿魏酸(0、0.25、0.5、1、2、4 mmol/L)对乙醇诱导肝细胞损伤后细胞周期的影响;b-阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤的G1/(G1+S+G2)比值
图3 阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤后细胞周期的影响
Fig.3 Effects of ferulic acid on cell cycle after ethanol-induced hepatocyte injury
注:与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01(下同)。
2.4 Western blot检测蛋白表达情况
乙醇经过转化生成的乙醛能引发DNA的双链断裂,γH2AX蛋白在其Ser139位点会发生磷酸化反应。这种磷酸化反应被认为是DNA双链断裂的一个重要标志。因此,通过测量γH2AX在Ser139位点的磷酸化水平,可以间接评估DNA双链断裂的程度。这种有效的手段,可以更准确地量化乙醛对DNA的损伤程度,并有助于人们更全面地理解乙醛如何影响细胞的遗传物质[20]。将LO2细胞经浓度为400 mmol/L的酒精培养基处理6 h后,加入不同浓度为0、0.12、0.25、0.5、1、2、4 mmol/L的阿魏酸培养基处理24 h。Western blot检测结果如图4所示,发现在酒精理组,p-H2AX蛋白的表达显著增加(P<0.01),暗示DNA双链发生了断裂。然而,当细胞被阿魏酸处理后,在0.25、0.5、1、2 mmol/L的浓度下,p-H2AX蛋白的表达显著减少,这表明阿魏酸可能帮助细胞进行DNA的修复。值得注意的是,在4 mmol/L的阿魏酸浓度下,p-H2AX蛋白表达量相对于低浓度却上升,修复效率下降,与图3-b在相同浓度下抑制DNA复制的结果保持一致。
a-阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤后p-H2AX蛋白的影响;b-阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤的p-H2AX/GAPDH比值
图4 阿魏酸对乙醇诱导的p-H2AX蛋白表达的影响
Fig.4 Effects of ferulic acid on ethanol-induced p-H2AX protein expression
2.5 阿魏酸对乙醇诱导ROS荧光强度变化的影响
酒精摄入是慢性肝病的主要病因,其通过乙醇的氧化代谢产物,如ROS和乙醛,扰乱细胞内信号通路和基因转录控制,导致脂肪积累和纤维化,以及免疫系统的激活。特别是,ROS通过激活蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)调节自噬过程影响脂滴的去除,并与乙醛共同诱导胶原的合成,进一步推进纤维化过程。同时,这两种物质能损害肠道屏障,改变免疫响应,进而形成突变型DNA加合物以及干扰DNA的甲基化、合成和修复,提高肝细胞发生癌症的风险。这一系列复杂的生物学过程最终结果是引发各种肝病,包括脂肪肝、肝硬化、肝纤维化、酒精性肝炎和肝功能衰竭等[21]。将LO2细胞经浓度为400 mmol/L的酒精培养基处理6 h后,加入不同浓度为0、0.12、0.25、0.5、1、2、4 mmol/L的阿魏酸培养基处理24 h。流式细胞仪检测结果如图5所示,相较于空白组,模型组中的ROS相对荧光强度提高了19.34%(P<0.01),表明乙醇的存在能显著提高ROS的水平。随着阿魏酸浓度0.12～4 mmol/L的逐步提升,观察到ROS荧光强度明显降低(图5-c)(P<0.01)。特别是当阿魏酸浓度为4 mmol/L时,相对荧光强度由119.34%降至35.93%(P<0.01)。这一结果可能暗示阿魏酸具有降低ROS生成的潜力。总的来说,阿魏酸通过抑制乙醇摄入引发的ROS生成,为在酒精性肝病治疗中的应用提供了可能。
a-阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤后活性氧的影响;b-阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤后活性氧的荧光图;c-阿魏酸对乙醇诱导肝细胞损伤相对荧光比值
图5 阿魏酸对乙醇诱导的活性氧的影响
Fig.5 Effects of ferulic acid on ethanol-induced reactive oxygen species
2.6 红绿双荧光蛋白检测阿魏酸对肝细胞自噬的影响
在细胞遭受DNA损伤时,损伤的严重程度决定了细胞采取的反应策略。对于轻度且可修复的损伤,细胞会启动保护机制,包括DNA修复、暂停细胞周期和自噬,这些都有助于维持细胞功能并避免损伤的进一步扩大。ATM(ataxia-telangiectasia mutated proteins)蛋白质通过与AMPK和TSC1/2(tuberous sclerosis1/2)的相互作用,调控自噬的过程。此外,ATM和ATR(ataxia telangiectasia and Rad3-related)蛋白质也可以激活p53,从而增强自噬的活动。相应地,自噬过程能够提供DNA修复所需的代谢前体物质,如ATP和脱氧核苷酸(deoxynucleotide,dNTPs),这些物质支持DNA修复过程中的能量需求和DNA合成,保证了如核苷酸切除修复和DNA双链断裂修复等复杂过程的顺利进行[22]。
在自噬激活过程中,LO2细胞内P62蛋白表达降低,LC3蛋白表达升高,细胞组分降解,表明LO2细胞自噬活性增强[23]。其中LC3是ATG8蛋白在哺乳动物中的同源体,它是自噬过程的关键因素。LC3蛋白家族由多个亚家族构成,包括LC3A、B、C和GABARAP等,而LC3B的研究最为深入。根据现有的研究,LC3B被视为自噬信号通道中最重要的标志性蛋白质。在细胞中转导带有绿色荧光的pCMV-GFP-LC3B质粒后,在非自噬状态下,成功转导的细胞会散发出绿色的GFP-LC3B荧光,这种荧光会以分散的方式存在于细胞质中。然而,当细胞处于自噬状态时,GFP-LC3B会聚集在自噬体膜上,以斑点的形式显示。再次优化方案,将绿色荧光蛋白质(green fluorescent proteins,GFP)和红色荧光蛋白质(red fluorescent protein,RFP)融合到LC3上作为新的自噬活性测定探针:GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。这种探针在细胞内形成后,比前述的类型更具特色,能够被ATG4蛋白质剪裁,这个过程会使GFP-LC3和RFP-LC3ΔG以1∶1的比例产生,即每个GFP-LC3的产生都伴随着1个RFP-LC3ΔG的生成。在细胞质中,GFP-LC3会散发绿色荧光。但是,当自噬体与溶酶体合并时,GFP-LC3的绿色荧光会消失,此时只能看到RFP-LC3ΔG的红色荧光,这是因为在酸性环境下,GFP的绿色荧光会减弱;另一方面,由于缺乏必要的末端甘氨酸,RFP-LC3ΔG不能进行脂化并停留在细胞内,因此发出红色荧光的RFP-LC3ΔG的数量基本保持不变,可以作为荧光反应的稳定标准[24]。因此,GFP和RFP的荧光强度之比是自噬活性的指标,GFP/RFP比值越低,表明自噬活性越高。
将红绿双荧光蛋白-LO2细胞经浓度为0、0.5、1、2、4、8 mmol/L的阿魏酸培养基处理24 h。流式细胞仪检测结果如图6所示,阿魏酸处理组的GFP荧光强度整体上都呈现下降的趋势,这可能意味着阿魏酸有促进细胞自噬的效果(如图6-a)。然而,这种效果并不呈线性,尤其在阿魏酸浓度为4 mmol/L时,GFP的荧光强度反而出现了上升。这可能表明,但在一定范围内,可能存在着一个最佳的浓度点。其次,通过观察GFP/RFP的荧光比值(如图6-b),可以看到,随着阿魏酸浓度的升高,荧光比值总体上呈现下降的趋势,这可能进一步证实了阿魏酸对细胞自噬具有一定的促进作用。然而,同样在4 mmol/L的阿魏酸浓度下,荧光比值反而上升,这可能是由于在某个浓度下,阿魏酸对细胞自噬的影响达到了一个平衡点。总的来说,阿魏酸对细胞自噬具有一定的影响,但这种影响可能是复杂的,存在着一个最佳浓度点,而且可能有其他未知的影响因素。因此,更深入的研究可能需要进一步探索阿魏酸对细胞自噬的具体机制,以及其在不同浓度下的作用差异。
a-不同浓度阿魏酸对细胞自噬的影响;b-不同浓度阿魏酸的GFP/RFP的荧光比值
图6 阿魏酸对肝细胞自噬通量的影响
Fig.6 Effects of ferulic acid on autophagy flux in hepatocytes
3 结论与讨论
本项研究针对阿魏酸对乙醇诱导的LO2肝细胞DNA损伤修复作用进行了深入探讨,并发现其作用具有明显的浓度依赖性。低浓度阿魏酸(0.5 mmol/L和1 mmol/L)能促进LO2细胞的增殖,而在高浓度(8 mmol/L和16 mmol/L)下则显著降低了细胞的存活率,表现出明显的细胞毒性。进一步实验发现,乙醇能够扰乱细胞周期,尤其是降低G1期细胞比例,而提高S期和G2期的比例,这可能是由于乙醇与DNA形成加合物,导致DNA复制和细胞分裂过程受阻。在这一背景下,阿魏酸在0.25～2 mmol/L能够提升G1期细胞比例,说明能够改善因乙醇引起的细胞周期紊乱,并可能促进DNA的修复,减少乙醇引起的p-H2AX蛋白表达增加,这暗示阿魏酸在该浓度下能修复乙醇导致的DNA损伤。然而,阿魏酸在较高浓度下,细胞周期受阻,DNA复制受到抑制,p-H2AX蛋白表达量增加,表明阿魏酸可能开始产生负面作用。此外,乙醇处理同样引起了细胞内ROS水平的显著增加,而阿魏酸能有效降低ROS的生成,尤其是在4 mmol/L浓度下,这可能表明阿魏酸在减缓氧化应激方面具有潜在的保护作用,这对于酒精性肝病的治疗尤为重要。另一方面,阿魏酸对红绿双荧光蛋白-LO2肝细胞的自噬显示,GFP荧光强度和GFP/RFP荧光比值,整体呈下降趋势,表明阿魏酸可能促进细胞自噬,但在高浓度时,GFP荧光强度和GFP/RFP荧光比值的上升变化表明自噬作用可能受到抑制。综上所述,阿魏酸显示了其在适宜浓度下对乙醇诱导的肝细胞DNA损伤具有修复作用,但在高浓度下可能会导致细胞功能受损。
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