蓝莓分类上属于杜鹃花科越橘属,是多年生灌木植物[1]。蓝莓富含花青素、类黄酮、酚酸等活性成分,具有抗炎、抗氧化、改善视力、防治心血管疾病、降血糖、抑制肿瘤等多种功能[2]。虽然蓝莓具有良好的药食两用功效,但是蓝莓保质期短、贮藏困难,冷链运输成本高且易受到机械损伤引起腐烂,不可避免地造成经济损失。因此,将其加工成产品是有效的改善办法,但蓝莓深加工比例较低,且蓝莓的加工产品技术含量偏低,开发产品较为单一,主要为果汁饮料、果干、果酱等技术含量低的产品[3],因此,开发高附加值的蓝莓深加工产品尤为重要。
蓝莓浆果中花青素类占总多酚类物质的60%,花青素分子结构易受到外界环境的影响而造成损失[4],益生菌发酵可以提高生物活性和增加有效成分,如ZHANG等[5]通过植物乳植杆菌发酵后的蓝莓汁总酚类物质增加43.42%,花青素含量提高15.83%。但蓝莓直接发酵由于初始pH值较低,不利于菌株生长,吴万林等[6]发现蓝莓汁中不同初始pH值对乳酸菌的生长具有较大影响,较高的pH值利于菌株的生长,蓝莓初始pH值为3.5时乳酸菌生长受到抑制。目前采用发酵技术研究大多集中在蓝莓单独发酵,蓝莓复配发酵研究较少,此外,发酵过程中由于需要高温高压进行灭菌,但花青素对热极敏感,使得蓝莓中的花青素极易损失。因此,本研究通过与黄精配伍调节蓝莓初始pH值,提高蓝莓发酵的效率,其次优化了发酵工艺中的灭菌方式,使蓝莓中活性物质得到有效保留。
感官评价是产品质量的直接体现,可以发现产品中潜在的问题,从而确保产品的稳定性和可靠性,进一步提高消费者满意度和期望值。现大多数研究的感官评价方法为人群感官评价。如李虹甫等[7]通过人群感官评价对发酵蓝莓果汁的发酵温度、发酵时间和初始接种量进行评价。近年来,随着智能感官评价技术的发展,如电子鼻、电子舌仿生技术表现出良好的适用性,且具有多维的感官特征,可避免个体味觉的主观影响,对样品的物理参数(如气味、颜色)进行客观量化[8-9]。STEVANS等[10]通过电子鼻分析鉴别不同收获期的4种不同品种的发酵蓝莓饮料。同时电子鼻、电子舌联用也可有效避免单一智能感官技术数据不足以支撑食品风味评价分析的发生[11]。因此,为更好地满足市场需求并提升产品附加值,本文将人群感官评价与仿生技术(电子鼻、电子舌)结合,更客观、全面地评价产品。
本研究将蓝莓配伍黄精复合发酵,调节蓝莓初始pH,通过建立“组分含量、仿生技术、人群感官”多维评价标准,以花青素含量、多酚含量、电子鼻、电子舌为单因素试验的综合评价标准,在此基础上采用正交试验与人群感官评价对工艺进行优化,为开发高附加值的蓝莓深加工产品提供依据,用于多维度评价发酵工艺提供参考。
蓝莓(蓝美1号),浙江蓝美技术股份有限公司;植物乳植杆菌P9冻干粉(2 000亿CFU/g),江中药业股份有限公司;黄精(C22031017),河北省安国市安国润德药业有限公司,经江西中医药大学药学院付小梅教授鉴定为百合科植物黄精(Polygonatum kingianum)的根茎。
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准品(纯度≥95%)、福林-酚试剂,上海源叶生物科技有限公司;没食子酸标准品(纯度≥99%),上海麦克林生化科技有限公司;甲醇(色谱纯),上海安谱实验科技股份有限公司;Na2CO3、无水醋酸钠、KCl、盐酸(均为分析纯),国药集团化学试剂有限公司;无水葡萄糖(食品级),山东保龄宝生物股份有限公司;三氯蔗糖(食品级),精禾实业有限公司;木糖醇(食品级),安阳豫鑫木糖醇科技有限公司;复合甜味剂(食品级),禹城乐富健生物技术有限公司。
ZQZY-85BN振荡培养箱,上海知楚仪器有限公司;BSA8201电子天平(精度0.01 g),赛多利斯科学仪器有限公司;HH-4恒温水浴锅,常州国华电器有限公司;无菌操作台,济南鑫贝西生物技术有限公司;HM-928果蔬料理机,广东黑马电器有限公司;5424R离心机,德国Eppendorf公司;FE28-STANDARD型pH计,瑞士METTLER TOLEDO公司;MD SpectraMAX M2多功能酶标仪,德国Spectra公司;SA-402B电子舌,日本insent公司;Heracles NEO超快速气相电子鼻,法国Alpha MOS公司。
1.3.1 工艺流程
蓝莓、黄精前处理→打浆→灭菌→发酵→离心→矫味→灭菌→成品
上述流程的工艺要点具体为:
前处理:蓝莓浆果,经烫漂5 min,黄精去除杂质后浸泡1 h,蓝莓、黄精以不同质量比进行打浆。
打浆:按料液比1∶4(g∶mL)加入超纯水后,添加质量分数2%无水葡萄糖进行打浆。
灭菌:经95 ℃沸水浴灭菌15 min后立即冷却至室温。
发酵:接种植物乳植杆菌P9冻干粉质量分数0.05%,置于37 ℃培养箱中发酵32 h。由于多酚为蓝莓、黄精中重要的活性成分,且花青素为蓝莓中最具代表性功效成分,因此优选发酵工艺时,选取花青素含量、多酚含量及电子舌电子鼻为综合评价指标。
离心:10 000 r/min、18 ℃离心20 min,取上清液测定pH值。
矫味:以感官评分为评价指标,选取复合甜味剂(99.8%赤藓糖醇与0.2%甜菊糖苷,质量分数)、木糖醇、三氯蔗糖为预调甜味剂。
1.3.2 单因素试验
1.3.2.1 蓝莓、黄精质量比的考察
按上述工艺流程,蓝莓、黄精以不同质量比(1∶1、2∶1、4∶1、6∶1、8∶1)进行打浆。
1.3.2.2 发酵温度的考察
按上述工艺流程,发酵温度设置为25、29、33、37、41 ℃。
1.3.2.3 发酵时间的考察
按上述工艺流程,发酵时间设置为16、24、32、40、48 h。
1.3.3 正交试验
根据单因素试验结果,选取3个发酵因素中综合评分较高的水平,进行3因素3水平正交试验,综合评分按公式(1)计算:
综合评分
(1)
式中:x,花青素含量,mg/L;X,最大花青素含量,mg/L;y,多酚含量,mg/L;Y,最大多酚含量,mg/L。
1.3.4 多维评价建立
1.3.4.1 花青素含量测定
以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为标准品,参考YU等[12]的方法采用pH示差法检测花青素含量。将pH 1.0和pH 4.5缓冲液加到平行孔中,在孔中加入标准液或样品,在读板器中将板摇动30 s,然后在535 nm和700 nm处读取,计算标准品和样品的吸光度,其计算如公式(2)所示:
吸光度=(A1-A2)-(A3-A4)
(2)
式中:A1, pH=1.0时535 nm处的吸光度;A2, pH=1.0时700 nm处的吸光度;A3, pH=4.5时535 nm处的吸光度;A1, pH=4.5时700 nm处的吸光度。
绘制矢车菊素-3-O-葡萄糖苷相对于浓度的吸光度,并根据线性方程式计算样品的花青素浓度。
1.3.4.2 多酚含量测定
以没食子为标准品,采用福林-酚检测多酚含量,参考李虹甫等[7]的方法略有改动。在孔中加入标准液或样品,随后分别加入0.2 mol/L的福林-酚试剂,轻轻振荡后静置10 min,最后分别加入质量分数7.5%的Na2CO3溶液,密封板,静置30 min,在765 nm处读取吸光度,绘制没食子酸相对于浓度的,并根据线性方程式计算样品的多酚浓度。
1.3.4.3 电子舌分析测定
采用电子舌对不同样品进行味觉变化分析。精确吸取32 g样品或基准液于电子舌专用杯中,每个样品重复测定4次,采集时间120 s,使用CAO、COO、AE1、CTO传感器分别对样品酸味、苦味、涩味、苦味回味、涩味回味、鲜味、鲜味回味、咸味进行检测。使用电子舌自带数据处理软件进行分析。
1.3.4.4 电子鼻分析测定
采用电子鼻对不同样品进行气味变化分析。根据前期预实验,精确吸取2 g样品于电子鼻专用顶空瓶中,每个样品重复测定3次,进样体积3 500 μL,孵化温度50 ℃,孵化时间10 min,加热振荡器振荡速度250 r/min,进样速度125 μL/s, 捕集阱初始温度40 ℃,捕集阱分流速率10 mL/min, 捕集时间17 s, 阀温度250 ℃, 柱温的程序升温方式1 ℃/s至80 ℃,以3 ℃/s至250 ℃,时间21 s, 采集时间110 s。使用Heracles电子鼻自带数据处理软件进行分析。
1.3.4.5 建立多维评价标准
本实验以花青素、多酚、电子鼻、电子舌4个指标建立综合评价标准,对单因素考察结果进行综合分析,电子鼻评分标准以最高3组峰面积的平均值为评价标准,电子舌以酸味、苦味、涩味、鲜味、咸味之和作为评价标准,其中考虑到花青素、多酚是蓝莓中主要有效成分,所以权重系数均设定为0.3,产品的风味、滋味导致消费者的满意度和购买决策的变化,电子鼻和电子舌作为智能仿生技术,不仅避免了人群感官评价的主观性,还能提供产品多维度的信息,从而有助于提升产品的附加值,故权重系数均设定为0.2,综合评分的计算如公式(3)所示:
综合评分
(3)
式中:x,花青素含量,mg/L;X,最大花青素含量,mg/L;y,多酚含量,mg/L;Y,最大多酚含量,mg/L;m,电子鼻最高3组峰面积的平均值,μV·s;M,最大电子鼻最高3组峰面积的平均值,μV·s;z,电子舌响应值之和;Z,最大电子舌响应值之和。
1.3.4.6 复合发酵饮人群感官测评试验
由20名评价员对产品的感官指标打分。在白光下评价样品,样品间至少间隔30 s以上,每个品评盘的样品量保持一致。感官分析评价标准具体见表1。
表1 复合发酵饮的感官分析评价标准
Table 1 Evaluation criteria for sensory analysis of complex fermented beverages
指标/特性描述词列表气味差-1,较差-2,中等-3,较好-4,好-5色泽差-1,较差-2,中等-3,较好-4,好-5酸味过酸-1,较酸-2,稍酸-3,适中-4,较好-5甜味过甜-1,较甜-2,稍甜-3,适中-4,较好-5整体风味差-1,较差-2,中等-3,较好-4,好-5后味差-1,较差-2,中等-3,较好-4,好-5
采用SPSS 27.0进行方差分析和Origin 2022软件对实验数据进行绘图。
2.1.1 质量比对复合发酵饮的影响
如图1所示,花青素与多酚含量随着蓝莓的添加质量比的增加而增加,当质量比为6∶1、8∶1时,多酚含量最高,发酵后pH值均比发酵前低。通过Heracles超快速气相电子鼻对不同样品进行检测分析,得到2根不同极性色谱柱MXT-5(低极性)和MXT-1701(中极性)的气味图谱,通过Origin 2022拟合成图2,由气味指纹图谱可以看出,不同质量比色谱信息有明显差异,利用主成分分析(principal component analysis, PCA)样品组间气味差异所在。图3可知电子鼻PCA中PC1和PC2方差贡献率之和为95.098%,因此PC1和PC2可以代表样品中的实际情况,结合表2可知,当蓝莓黄精质量比为 6∶1 与4∶1或8∶1时的距离较远,表明它们之间的香气构成差异较大,1∶1与2∶1距离最小,说明气味相似,表明电子鼻技术可有效区分不同质量比样品。
a-花青素;b-多酚;c-pH值
图1 质量比对花青素、多酚含量及pH值的影响
Fig.1 Effect of mass ratio on anthocyanin content, polyphenol content, and pH
注:不同字母表示组间具有显著性差异(P<0.05)(下同)。
a-MXT-5气味图谱;b-MXT-1701气味图谱
图2 质量比气味指纹图谱
Fig.2 Odor fingerprinting of different mass ratio
图3 质量比电子鼻PCA结果
Fig.3 Electronic nose PCA results of different mass ratio
表2 质量比样品间的距离与区别指数
Table 2 Distance and differentiation index between samples with different mass ratio
序号样品组参照组距离区别指数/%14∶16∶110 434.0899.3724∶18∶15 753.0697.7334∶12∶16 391.1297.8044∶11∶17 859.2098.6656∶18∶17 941.0399.6466∶12∶14 950.8398.4876∶11∶12 989.2096.8088∶12∶14 450.4297.7698∶11∶15 758.3398.90102∶11∶12 616.9192.95
电子鼻检测物质含量程度表现在峰面积上,可通过峰面积对样品的相对含量进行分析[13-14],将采集到的挥发性成分的色谱峰进行特征成分分析[15],表3列出了样品中峰面积、峰响应值、相关指数分别在500、2 000、80以上的主要差异化合物分别为乙醛、丙烯醛、丙-2-酮、3-甲基戊烷、环戊烷,并对气味进行描述。电子舌雷达图结果显示,8∶1时苦味、涩味、咸味最小,酸味最大(图4)。利用电子舌技术可以很好地区分不同蓝莓黄精质量比样品中的味觉差异。最后,电子舌PCA结果如图5所示,主要综合了酸味、苦味、涩味、咸味、鲜味,其中苦味、涩味、咸味、鲜味在PC1上呈正向分布,酸味、苦味、涩味则在PC2上呈正向分布,PC1与PC2的贡献率之和达到97.6%,因此可以很好地反映样品中的实际信息。图中可以看出,随着质量比的增加,苦味、涩味、咸味、鲜味减少,酸味增加。
图4 质量比电子舌雷达图
Fig.4 Radar chart of electronic tongue based on mass ratio
注:以基准溶液为无味点,除了酸味和咸味,其他指标的无味点均为0,基准溶液中含有少量的酸和盐,酸味和咸味的无味点分别为-13 和-6,通常将大于无味点的味觉项目作为评价对象(下同)。
a-因子载荷图;b-因子得分图
图5 质量比电子舌PCA结果
Fig.5 Electronic tongue PCA results of different mass ratio
a-花青素;b-多酚;c-pH值
图6 发酵温度对花青素、多酚含量及pH值的影响
Fig.6 Effect of fermentation temperature on anthocyanin content, polyphenol content, and pH
a-MXT-5气味图谱;b-MXT-1701气味图谱
图7 发酵温度气味指纹图谱
Fig.7 Odor fingerprinting of different fermentation temperature
表3 质量比主要差异化合物定性分析
Table 3 Qualitative analysis of compounds with major differences in mass ratios
序号色谱柱保留参数MXT-5-FID1MXT-1701-FID2化合物名称气味描述峰面积/(μV·s)1∶12∶14∶16∶18∶11438493乙醛醛基、大气、新鲜、水果、愉悦的4 9966 25810 0504 1726 5673467563丙烯醛杏仁、樱桃4 6503 7895 1394 0592 3194490596丙-2-酮独特的、水果、甜的、紫罗兰2 490—2 3412 253—55855603-甲基戊烷/———4 601—6585562环戊烷甜的、淡味的3 7193 166———
注:—表示未检出;/表示无相关描述(下同)。
2.1.2 发酵温度对复合发酵饮的影响
如图6所示,随着发酵温度的增加,花青素含量呈先平稳后下降的趋势,与白琳[16]的研究趋势一致,发酵温度为29 ℃时,花青素含量最高(217.67 mg/L),这可能是在适宜的温度时植物乳植杆菌在发酵过程中促进了花色苷的代谢能力[17],有益于花青素的水解,但当温度达到33 ℃时,花青素分子受到破坏,导致含量显著下降,这与花青素对温度极其敏感的属性相符[2];当发酵温度37 ℃时,多酚含量最高,推断是因为发酵过程中的环境条件可能影响酚类化合物的合成,或是前体物质的转化,大分子多酚被分解成小分子酚[3, 7]。图7中不同发酵温度色谱信息有明显差异。通过图8可知PC1和PC2方差贡献率之和为99.78%,可以看出不同样品聚集在不同的区域且相互没有重叠,结合表4,25 ℃与41 ℃的区别指数最大,说明气味差异较大,25 ℃与37 ℃区别指数最小,说明气味相似。因此,电子鼻技术在不同发酵温度样品中也可得到有效区分。表5可知,电子鼻通过获取不同样品的气味指纹图谱,借助Kovats保留指数和Arochembase数据库,对样品中的主要挥发性物质进行定性分析,具体成分为乙醛、丙烯醛、丙-2-酮、2,3丁二酮,并对它们的气味进行分析描述。电子舌雷达图结果显示,当发酵温度在37 ℃时酸味响应值最大(图9),PCA(图10)可以看到PC1和PC2的方差贡献率和为83.9%,表明主成分1和主成分2能够反映样品中的全部信息。不同发酵温度之间存在一定的距离,随着发酵温度的增加,酸味增加,鲜味、苦味、咸味减少,但当发酵温度达到37 ℃时,酸味、涩味变化最大,苦味最小。
图8 发酵温度电子鼻PCA结果
Fig.8 Electronic nose PCA results of different fermentation temperature
图9 发酵温度电子舌雷达图
Fig.9 Electronic tongue radar chart for fermentation temperature
a-因子载荷图;b-因子得分图
图10 发酵温度电子舌PCA结果
Fig.10 PCA results of fermentation temperature electronic tongue
a-花青素;b-多酚;c-pH值
图11 发酵时间对花青素、多酚含量及pH值的影响
Fig.11 Effect of fermentation time on anthocyanin and polyphenol content, and pH
a-MXT-5气味图谱;b-MXT-1701气味图谱
图12 发酵时间气味指纹图谱
Fig.12 Odor fingerprinting of different fermentation time
表4 发酵温度样品间的距离与区别指数
Table 4 Distance and difference index between samples with different fermentation temperature
序号样品组/℃参照组/℃距离区别指数/%125296 333.9595.62225374 261.5797.813254117 832.1699.954293710 454.5998.215294124 028.9399.706333712 717.7299.387334126 356.8699.898374113 729.2799.84
表5 发酵温度主要差异化合物定性分析
Table 5 Qualitative analysis of compounds with major differences in fermentation temperature
序号色谱柱保留参数MXT-5 FID1MXT-1701 FID2化合物名称气味描述峰面积/(μV·s)25 ℃29 ℃33 ℃37 ℃41 ℃1442498乙醛新鲜、水果、愉悦的6 0406 3528 25712 1557 3182466561丙烯醛杏仁、樱桃3 1412 7242 7442 8602 6173489594丙-2-酮独特的、水果、甜的、紫罗兰2 4772 0252 0422 0771 66645846892,3-丁二酮水果、菠萝、甜的、强烈的2 6362 2091 420——
2.1.3 发酵时间对复合发酵饮的影响
由图11可知,发酵时间在16~48 h时,花青素含量呈逐步上升后直至平稳再下降的趋势,当发酵时间为16 h花青素含量最高(147.64 mg/L);发酵时间<32 h时,多酚含量较为平稳,当发酵时间为32 h时,多酚含量达到最高值(312.99 mg/L),32~48 h多酚含量呈下降的趋势,推断是因为微生物在发酵过程中会产生一系列酶,可催化多酚类物质,同时还可能分解细胞壁,从而释放细胞内的酚类化合物[18],可见微生物发酵对多酚的生物可及性具有积极作用[19-20]。图12中不同发酵时间色谱信息有明显差异,PCA(图13)中PC1和PC2方差贡献率之和为98.937%,结合表6所示,24 h与40 h区别指数最大,且距离较远,说明气味差异最大,16 h与32 h距离最小,说明香气差异较小。表7列出了样品中主要差异化合物名称分别为乙醛、丙烯醛、丙-2-酮、己醛,并对气味进行描述。如图14所示,发酵40 h酸味、涩味响应值最大、咸味响应值最低,24 h酸味最小,如图15所示,随着发酵时间的增加,酸味增加,咸味减少,当发酵到40 h时酸味最突出,发酵32 h和48 h之间距离相差最小,即发酵滋味变化小。
图13 发酵时间电子鼻PCA结果
Fig.13 PCA results of fermentation time electronic nose
图14 发酵时间电子舌雷达图
Fig.14 Fermentation time electronic tongue radar chart
a-因子载荷图;b-因子得分图
图15 发酵时间PCA结果
Fig.15 PCA results of fermentation time electronic tongu
表6 发酵时间样品间的距离与区别指数
Table 6 Distance and differentiation index between samples of different fermentation time
序号样品组/h参照组/h距离区别指数/%116 24 4 397.4298.95216 32 2 017.9992.81316 40 12 579.3499.72416 48 2 077.0293.82524 32 6 174.7099.61624 40 16 731.5799.90724 48 6 064.0899.68832 40 10 826.7499.67932 48 1 836.6193.681040 48 10 936.0799.70
表7 主要差异化合物定性分析
Table 7 Qualitative analysis of major difference compounds
序号色谱柱保留参数MXT-5 FID1MXT-1701 FID2化合物名称气味描述峰面积/(μV·s)16 h24 h32 h40 h48 h 1437493乙醛水果、大气、新鲜、愉悦的4 3871 7945 53312 9385 5302466561丙烯醛杏仁、樱桃2 2592 3372 5502 5162 8173489594丙-2-酮独特的、水果、甜的、紫罗兰1 2301 2741 3621 7321 3434801894己醛新鲜、水果、甜、葡萄酒—947———
2.1.4 单因素综合评分结果
根据单因素试验中建立的物质(花青素、多酚含量)、仿生技术(电子鼻和电子舌分析)多维评价结果可知,当蓝莓黄精质量比为8∶1时得分最高,总评分为85.786分;发酵温度在37 ℃时得分最高,总评分为90.718分;发酵时间在40 h时得分最高,总评分为88.029分,具体评分见表8。
表8 综合评价结果表
Table 8 Comprehensive evaluation results matrix
组别花青素评分多酚评分电子鼻评分电子舌评分总分质量比1∶16.11717.84512.81120.00057.7732∶16.97622.63513.38215.14158.1344∶122.61226.65220.00014.70483.9686∶126.39229.12410.99516.44082.9518∶130.00030.00011.99113.79585.786温度/℃2529.44328.56113.64117.85089.4952930.00027.43812.98918.85089.2773328.14327.39015.26219.60390.3983720.71830.00020.00020.00090.7184116.93027.63613.57519.62677.767时间/h1630.00026.3339.16515.10980.6072428.65026.5436.28914.17275.6543228.83730.00010.99016.36386.1904021.27926.75020.00020.00088.0294815.11526.05311.27720.00072.445
2.2.1 正交试验设计
根据上述单因素试验结果选出综合评价较高的水平,因考虑发酵温度对工业生产的准确性,选择29、37、41 ℃更高宽度的实验范围来确定发酵温度。以花青素、多酚含量为考察指标,进行3因素3水平正交试验设计。具体见正交因素水平表L9(33)见表9。
表9 正交因素水平表L9(33)
Table 9 Orthogonal factors and levels L9(33)
水平A(质量比)B(发酵温度)/℃C(发酵时间)/h14∶1292426∶1373238∶14140
根据正交因素水平表设计正交试验表10,由极差R值可知,影响因素C>B>A,即:发酵时间>发酵温度>质量比;最优的发酵工艺为A3B2C2,为质量比8∶1;发酵温度为37 ℃;发酵时间32 h。
表10 复合发酵饮L9(33)正交试验表
Table 10 Complex fermented drink L9(33) table of orthogonal experiments
试验次数A(质量比)B(发酵温度)/℃C(发酵时间)/h花青素含量/(mg/L)多酚含量/(mg/L)综合评分14∶12924152.520213.14175.94824∶13740150.216259.10984.41534∶14132156.570252.73684.59746∶12932163.196222.17980.11456∶13724164.723240.63584.06566∶14140171.951275.69692.54378∶12940135.128214.16272.23788∶13732214.330254.98798.02298∶14124108.730194.97662.553K184.65376.0174.187K285.57488.83483.065K377.60479.83787.517R7.9712.82413.33
2.2.2 验证试验
为验证发酵工艺的实践性,进一步验证正交试验得出的发酵工艺A3B2C2。计算平均值及相对标准偏差,结果见表11。
表11 发酵工艺验证结果
Table 11 Fermentation process validation results
评价指标含量/(mg/L)组1组2组3平均值RSD/%花青素183.662177.844175.905179.1372.254多酚322.445310.307310.859314.5372.179
花青素、多酚含量平均值分别达到179.137、314.537 mg/L,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为2.254%、2.179%,RSD值均小于3%,本工艺重现性较好。
2.2.3 复合发酵饮人群感官测评试验
通过正交试验的发酵工艺,样品分别添加7%(质量分数,下同)复合甜味剂、8%木糖醇、0.025%三氯蔗糖3种甜味剂后进行感官评价。结果如表12所示,除甜味外,气味、色泽、酸味、整体风味、后味均无显著性差异,但从总评分上可以看出,添加0.025%三氯蔗糖的总评分低于其他2组,添加7%复合甜味剂与8%木糖醇的总评分接近。有研究发现在饮食中摄入的木糖醇能产生有益于人体健康的代谢物,同时也可达到优化产品生产工艺和提升品质的目的[21]。故最终确定添加8%的木糖醇矫味。
表12 复合发酵饮人群感官测评试验评分结果
Table 12 Scoring results of the sensory evaluation of composite fermented drinking groups
特性组别7%复合甜味剂组8%木糖醇组0.025%三氯蔗糖组气味2.58a2.78a2.74a色泽3.69a3.85a3.77a酸味2.85a2.83a3.26a甜味3.83a3.48ab3.05b整体风味3.39a3.38a3.26a后味3.16a3.15a2.95a总评分19.5019.4719.03
注:不同字母表示显著性差异(P<0.05)。
益生菌发酵是一个降糖产酸的过程,对风味、口感、保质期均具有改善作用[22]。马晓娟等[23]发现接种植物乳植杆菌P9可使枸杞汁总糖、葡萄糖含量显著下降,短链脂肪酸、抗氧化活性显著提升。范俊华等[24]以柚子、苹果、梨的混合汁为主要原料,通过植物乳植杆菌发酵后,发酵饮料的贮藏时间可维持3个月,且口感基本无变化,极大地延长了果汁的货架期。蓝莓与其他浆果相比具有较高的多酚含量,可产生大量健康益处,但由于多酚具有较多的羟基,很容易发生降解,通过发酵可提高蓝莓多酚的稳定性与增加其含量[25]。此外,蓝莓中所含的花青素是一种天然水溶性植物色素,具有广泛的药理活性,但花青素极不稳定,如李洁雅等[26]发现随着贮藏时间的延长,马铃薯中花青素的含量大幅度下降,而在发酵过程中乳酸菌大量产酸。侯文焕等[27]发现贮藏温度对玫瑰茄中原花青素的含量具有显著下降的影响。但是在酸性条件下花青素显著提高,乳酸菌发酵是提高花青素稳定性的有效技术[28]。如张晨颜等[29]通过乳酸菌发酵蓝莓汁后发现花青素和总酚含量显著增加,其中锦葵色素-3-O-半乳糖苷含量增加16.87%,且发酵后抗氧化活性也显著增强。王静雯[30]发现乳酸菌发酵蓝莓后锦葵花素-3-O-半乳糖苷、锦葵花-3-O-葡萄糖苷、锦葵花-3-O-阿拉伯糖苷、飞燕草色素-3-O-半乳糖苷均有所增加。
仿生技术(电子鼻、电子舌)可实现实时质量检测和快速分析[14]。Heracles II型电子鼻分为快速气相色谱仪、氢离子火焰探测器、数据处理软件,可将采集到的挥发性成分的色谱峰进行特征成分分析,类似于气相色谱-质谱法的定性分析能力[15]。WANG等[31]通过电子鼻线性判别分析和PCA能够有效区分乳酸菌发酵蓝莓前后挥发性物质的变化。电子舌作为一种仿生技术,是模拟人舌头对样品进行分析、识别和判断,弥补了评价员在味觉上分辨力、敏感度、稳定性等方面存在的个体差异[32]。王利萍等[33]通过电子舌分析不同残糖含量蓝莓酒的整体风味。
本研究通过组分含量(花青素、多酚)、仿生技术(电子鼻、电子舌)及人群感官测试多维评价确定最佳发酵饮的工艺的质量比为8∶1(蓝莓:黄精)、发酵温度37 ℃、发酵时间32 h,木糖醇8%。该工艺条件下的蓝莓复合发酵饮具有独特的发酵风味和清新的果香。为深入研究蓝莓与乳酸菌发酵饮品的开发提供了理论基础与可行性,并为开发蓝莓高附加值产品提供新方法,为评价发酵工艺提供新思路。
蓝莓具有较强的清除体内自由基,降低氧化应激水平、抗炎等药理作用,如王储炎等[34]研究结果显示发酵后的蓝莓汁在清除DPPH自由基和ABTS阳离子自由基能力得到显著提升,杨琦等[35]通过复合菌种发酵蓝莓发现总多酚含量和抗氧化能力均得到提高。此外,还有文献报道植物乳植杆菌可以将大多数酚酸转化为一些强抗氧化物质,提高酚酸在人体的生物利用度[4],因此,未来将更全面地探讨发酵前后成分变化,在明确物质的基础下,进一步考察蓝莓复合饮的功能。通过体外抗氧化、细胞、动物等实验开展其功效及机制的研究,为开发高附加值的蓝莓提供更充分的科学依据。
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