普鲁兰多糖-可溶性大豆多糖抗菌膜的制备及应用研究

赵璠1,江李君2,李双蝶1,王晨宇2,孙迪1,刘宇1, 2*,姜维1, 2*

1(浙江海洋大学, 国家海洋设施养殖工程技术研究中心(创新应用研究院),浙江 舟山,316022)

2(浙江海洋大学 食品与药学学院,浙江 舟山,316022)

摘 要 目前,可食膜作为潜在包装材料,性能有待提升。为改善普鲁兰多糖-可溶性大豆多糖(pullulan-soluble soybean polysaccharide,PS)热封膜的抗菌活性,提升其应用潜力,该文制备了负载ε-聚赖氨酸盐酸盐(ε-polylysine hydrochloride,ε-PL)的PS抗菌膜,分析了ε-PL添加量对PS抗菌膜结构、物理性能和抗菌活性的影响,并评价了PS抗菌膜包装肽粉的应用效果。结果表明,ε-PL与成膜基质相互作用生成氢键,并提高了PS抗菌膜的水分含量、断裂伸长率、阻隔性能和抗菌活性,降低了水接触角、拉伸强度、溶解时间和透光率,对热封强度和厚度无显著影响。当ε-PL添加量为0.4%(PS-0.4)时,膜的表面均匀致密、溶解时间短、抗菌活性和阻隔性能最佳。包装肽粉的应用结果表明,PS-0.4可有效抑制肽粉包装的吸湿率和菌落总数,且可在25 s内速溶。因此,该文制备了一种具有良好应用潜力的热封速溶抗菌膜,为便携式即热即溶方便食品提供包装材料支撑。

关键词 抗菌活性;普鲁兰多糖-可溶性大豆多糖膜;速溶;热封;吸湿

食品包装被用于食品运输、储存、销售过程中维持食品质量稳定性,延长食品的货架期。目前,食品包装主要来源于不可再生的化石能源,不仅会导致环境污染,还可能因塑料中的添加剂向食品中迁移影响人体健康[1]。可食用速溶包装作为一种新型包装,因其安全性和可降解性引起广泛关注[2]

普鲁兰多糖是一种广泛应用于食品、医药和化妆品等行业的线性非离子多糖[3]。普鲁兰多糖膜具有透明度高、可印刷和可热封等优点,但由于价格昂贵且柔韧性差,限制了其在包装工业上的应用。可溶性大豆多糖膜具有良好的溶解性、柔韧性、抗黏结性和抗氧化性[4]。普鲁兰多糖与可溶性大豆多糖复配,不仅可以降低生产成本,还可一定程度上改善普鲁兰多糖膜的柔韧性。然而,多糖膜作为潜在碳源,易滋生微生物,影响食品品质[5]。例如,申志翔[6]采用玉米-小麦淀粉复合膜包装豆奶粉,在贮藏过程中观察到包装外表面有发霉现象。因此,有必要提高普鲁兰多糖-可溶性大豆多糖(pullulan-soluble soybean polysaccharide,PS)膜的抗菌性能。

ε-聚赖氨酸盐酸盐(ε-polylysine hydrochloride,ε-PL)是微生物代谢生产的一种小分子肽,具有广谱抗菌性,可以通过静电吸引力破坏细胞膜并干扰基因表达,最终导致微生物死亡[7]。鲍若晗等[8]研究表明添加ε-PL的海藻酸钠膜可有效抑制蓝莓贮藏过程中腐败菌的生长;YONG等[9]将ε-PL添加到大豆分离蛋白/海藻酸钠膜中,将牛肉的保质期延长了3 d。可见将ε-PL添加至可食用膜中提高膜的抗菌活性是可行的。

目前,关于添加ε-PL提高PS膜安全性和应用性的研究还鲜有报道。本研究将ε-PL添加到PS膜中,制备PS抗菌膜,分析ε-PL添加量对PS抗菌膜结构特征、物理性质和抗菌活性的影响,探究PS抗菌膜对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性,筛选出最适的ε-PL添加量,并评价其包装蛋白肽粉的应用效果,为新型绿色食品包装研发提供理论和技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

普鲁兰多糖,上海阿拉丁生化科技股份有限公司;可溶性大豆多糖,山东聚源生物科技有限公司;甘油,国药集团化学试剂有限公司;ε-聚赖氨酸盐酸盐,浙江新银象生物工程有限公司;蛋白肽粉,采用脱脂南极磷虾粉(Euphausia superba)酶解制备;大肠杆菌(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌(ATCC25923),中国工业微生物菌种保藏中心;LB培养基,海博生物技术有限公司。

XS105DU电子天平,上海梅特勒-托利多仪器有限公司;GZX-9140MBE鼓风干燥箱、BSC-150恒温恒湿箱、YXQ-LS-75立式高压蒸汽灭菌锅,上海博讯实业有限公司医疗设备厂;CR-400色差仪,日本Minolta公司;Iraffinity-1 s傅里叶红外光谱仪、UV-2600紫外分光光度计,日本Shimadzu公司;MiniFlex 600 X-射线衍射仪,日本Rigaku公司;SDC-100光学接触角测定仪,东莞盛鼎精密仪器有限公司;OS20-PRO搅拌器,北京大龙兴创实验仪器股份公司;ZQ-990LA电动拉力试验机,东莞市智取精密仪器有限公司;CV-RF热封试验仪,东莞西瓦卡精密量仪有限公司;SYA-7045 JY测厚规,德清盛泰芯电子科技有限公司;Sigma 300扫描电子显微镜,德国ZEISS公司;SW-CJ-2FD超净工作台,苏净集团苏州安泰空气技术有限公司;DH600BII电热恒温培养箱,天津泰斯特仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 PS抗菌膜的制备

称取3 g普鲁兰多糖和3 g可溶性大豆多糖分别溶于100 mL去离子水中,270 r/min搅拌3 h,得到30 g/L普鲁兰多糖溶液和30 g/L可溶性大豆多糖溶液。将普鲁兰多糖溶液与可溶性大豆多糖溶液按9∶1(体积比)的比例混合,加入20%(质量分数)的甘油,分别添加0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%和0.5%(质量分数)的ε-PL到混合溶液中,270 r/min搅拌3 h,得到成膜液。取20 mL成膜液倒入方形塑料皿(10 cm×10 cm),在25 ℃、40% RH下干燥24 h成膜。揭膜后置于25 ℃、50% RH的环境中平衡48 h,得到PS抗菌膜。将不同ε-PL添加量的抗菌膜分别命名为PS-0,PS-0.1,PS-0.2,PS-0.3,PS-0.4和PS-0.5。

1.2.2 膜的表征

1.2.2.1 微观形貌

将膜裁成20 mm×20 mm,采用扫描电子显微镜拍摄膜放大2 000倍的表面和截面形貌,截面采用液氮脆断并喷金处理。

1.2.2.2 傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)

膜样品进行干燥处理,加入KBr充分研磨混匀,压片制成透明薄片,以KBr薄片作为空白对照,采用FTIR仪在波数范围4 000~ 600 cm-1下扫描32次。

1.2.2.3 X-射线衍射(X-ray diffraction,XRD)

采用XRD仪分析膜样品,扫描衍射角范围为5°~60°,扫描速率为2 °/min。

1.2.3 膜的物理性质

1.2.3.1 厚度

膜上随机选取5个位置,采用测厚规测量厚度,结果取平均值。

1.2.3.2 色差

采用色差仪测量膜颜色参数,以标准白板为对照,每个样品随机测量3个点。总色差(ΔE)按公式(1)计算:

(1)

式中:L*,样品亮度;a*,样品红绿度;b*,样品黄蓝度;L0,标准白板亮度;a0,标准白板红绿度;b0,标准白板黄蓝度。

1.2.3.3 水接触角

将膜(10 mm×20 mm)贴在载玻片表面,滴上10 μL去离子水,采用光学接触角测定仪测量膜的水接触角。

1.2.3.4 水分含量

将称量瓶在105 ℃鼓风干燥箱中烘干至恒重。称取1 g膜放入称量瓶中,在105 ℃的鼓风干燥箱中再次烘干至恒重。水分含量的计算方法按公式(2)计算:

水分含量

(2)

式中:m1,膜的初始质量,g;m2,膜干燥后的质量,g。

1.2.3.5 机械性能

根据GB/T 1040.3—2006《塑料 拉伸性能的测定 第3部分:薄塑和薄片的试验条件》的方法,将膜裁成20 mm×80 mm,放入电动拉力试验机夹具中,设置夹具初始距离40 mm、试验速度50 mm/min,记录最大载荷和断裂变形。拉伸强度与断裂伸长率分别按公式(3)、公式(4)计算:

拉伸强度

(3)

断裂伸长率

(4)

式中:F,膜断裂瞬间所承受的最大负荷,N;S,膜的横截面积,m2;L,膜断裂时的长度,mm;L0,膜的原长,mm。

1.2.3.6 阻隔性能

水蒸气透过率[10]:膜裁成40 mm×40 mm,干燥恒重的称量瓶中放入3 g无水硅胶后将膜附在瓶口并用蜂蜡和石蜡的混合物密封。将称量瓶放入装有蒸馏水(100% RH)的干燥器中每24 h记录称量瓶的质量,持续一周。水蒸气透过率的计算方法按公式(5)计算:

水蒸气透过率

(5)

式中:Δm/t,单位时间内称量瓶增加的质量,g/s;x,膜的厚度,cm;S,膜的试验面积,cm2P,膜两侧的蒸汽压差,Pa。

氧气透过率[11]:膜裁成40 mm×40 mm,附在装有3 g FeSO4·7H2O的称量瓶上并用橡胶和石蜡密封。将称量瓶放入含有饱和NaCl溶液(75% RH)的干燥器中每24 h记录称量瓶的质量,持续1周。氧气透过率的计算方法按公式(6)计算:

氧气透过率

(6)

式中:Δm/t,单位时间内称量瓶增加的质量,g/s;x,膜的厚度,cm;S,膜的试验面积,cm2

透光率:膜裁成5 mm×40 mm,放入分光光度计的测试池中。在200~800 nm波长范围内扫描,记录紫外可见透射光谱。

1.2.3.7 热封强度

根据LIU等[12]的方法,将膜裁成15 mm×80 mm,两张膜面对面对齐,使用热封试验仪对膜进行热封,热封参数为热封温度150 ℃,热封时间4 s,热封压力0.2 MPa。热封后的样品以180°展开,两端分别固定在电动拉力试验机的夹具上,设置夹具初始距离60 mm、试验速度300 mm/min,读取试样断裂时的最大载荷。热封强度按公式(7)计算:

热封强度

(7)

式中:F,最大载荷,N;W,膜宽度,mm。

1.2.3.8 溶解时间

参考ZHAO等[13]的方法,称取1 g膜加入30 mL去离子水中,200 r/min搅拌至完全溶解,记录溶解时间。

1.2.4 膜的抗菌活性

参照LIAO等[14]的方法将膜裁成直径6 mm的圆片,紫外灯下膜两面各照射30 min。取100 μL的待测菌液在LB固体培养基上涂布均匀后,将圆片膜放在培养基上,以无菌滤纸作为对照。37 ℃培养24 h后测抑菌圈直径。

1.2.5 肽粉包装应用研究

1.2.5.1 肽粉包装和贮藏

将膜裁成9 cm×9 cm大小,对折并对长边和底部热封后得到热封袋,称取1 g肽粉加入热封袋中并进行封口,得到包装肽粉。将包装肽粉置于托盘中,在25 ℃、50% RH条件下的恒温恒湿箱中贮存60 d,分别于第0、5、10、15、20、25、30、60天取样。

1.2.5.2 外观

取包装肽粉置于光线良好、平整的桌面上进行拍照。

1.2.5.3 溶解时间

参考LIU等[12]的方法测定包装肽粉的溶解时间,将包装肽粉投入65 ℃水中并用玻璃棒搅拌(模拟食用过程)至完全溶解,记录溶解时间。

1.2.5.4 吸湿率

取包装肽粉进行称重,吸湿率计算方法如公式(8)所示:

吸湿率

(8)

式中:m1,第0天包装肽粉质量,g;m2,储存一段时间后包装肽粉的质量,g。

1.2.5.5 菌落总数

参考GB 4789.2—2022 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》方法测定包装膜及肽粉的菌落总数。将包装膜与肽粉分离,分别称取1 g膜样品和肽粉样品置于盛有9 mL无菌生理盐水的无菌离心管内,涡旋混合制成样品匀液,然后选择合适稀释度的样品匀液,吸取100 μL加入培养基中,涂匀。在培养箱中37 ℃培养48 h后记录菌落数量。

1.3 数据处理与分析

每个实验至少重复3次,结果以“平均值±标准差”表示。采用SPSS 26.0软件对数据进行单因素方差分析(ANOVA)和Tukey显著性检验,P<0.05为差异显著。采用Origin 2021软件绘图。

2 结果与分析

2.1 膜的表征

2.1.1 微观形貌

如图1所示,PS-0、PS-0.1、PS-0.2、PS-0.3和PS-0.4表面光滑平整,无空隙或裂纹,表明ε-PL和普鲁兰多糖、可溶性大豆多糖之间具有良好相容性;截面均匀致密,高度基本一致,与表1中PS抗菌膜厚度测量结果一致。此外,在PS-0.5的表面和截面观察到颗粒状物质,主要是由于过量的ε-PL趋于聚集,破坏了膜的均匀网络结构[14],同时这也是PS-0.5抗菌膜水蒸气透过率和氧气透过率有所提高的原因。

表1 膜的厚度、颜色、水接触角和水分含量
Table 1 Thickness, color, water contact angle, and moisture content of films

组别厚度/mm颜色L∗a∗b∗ΔΕ水接触角/°水分含量/%PS-00.057±0.002a95.12±0.06c-1.26±0.03d4.01±0.05a2.93±0.04a66.12±0.42e9.69±0.19aPS-0.10.058±0.003a94.97±0.14c-1.32±0.01d3.89±0.15a2.91±0.06a65.09±0.87de10.32±0.69aPS-0.20.057±0.001a94.94±0.07c-1.40±0.03c4.27±0.24a3.25±0.22a64.14±0.61cd11.00±0.68abPS-0.30.057±0.003a94.90±0.09c-1.54±0.03a5.33±0.19c4.23±0.22b62.37±0.26bc12.24±0.42bcPS-0.40.057±0.002a93.16±0.02b-1.44±0.05bc4.01±0.06a4.26±0.04b60.64±0.92b13.06±0.72cPS-0.50.057±0.003a92.56±0.10a-1.50±0.01ab4.79±0.12b5.22±0.04c57.79±0.83a13.57±0.27c

注:同一列中不同小写字母表示差异显著(P<0.05)(下同)。

图1 膜的微观形貌
Fig.1 Microscopic morphology of films

2.1.2 FTIR

如图2所示,未添加ε-PL的PS-0膜在3 691~3 013 cm-1处的特征峰归因于羟基的O—H键伸缩振动[15],随着ε-PL添加量的增加,该峰逐渐向更低波数移动,表明ε-PL与PS膜基质间发生相互作用,形成了氢键[14]。波数1 626 cm-1和1 050 cm-1处的峰分别对应乙酰基中的CO和多糖分子中的鼠李糖半乳糖醛酸分子[16]。添加ε-PL后没有新的特征峰生成,表明ε-PL与PUL/SSPS之间具有很好的相容性。

图2 膜的FTIR光谱
Fig.2 FTIR spectra of films

2.1.3 XRD

如图3所示,PS抗菌膜的XRD图谱在2θ为20°时出现衍射峰,表明抗菌膜具有无定形结构。此外,随着ε-PL添加量增加,PS抗菌膜对应的衍射峰强度有所降低,表明PS抗菌膜的结晶度降低,这种现象可能是由于ε-PL与PUL及SSPS基质之间形成了氢键[17],与FTIR结果一致。加入ε-PL后PS抗菌膜衍射峰位置没有发生明显变化,表明ε-PL与基质之间具有良好相容性,HE等[18]在羧甲基纤维素/ε-PL功能化明胶膜中也观察到相似的结果。

图3 膜的XRD图谱
Fig.3 XRD patterns of films

2.2 膜的物理性质

2.2.1 厚度、颜色、水接触角和水分含量

如表1所示,PS-0厚度为0.057 mm,添加ε-PL后膜的厚度没有显著变化(0.057~ 0.058 mm)(P>0.05),这可能是由于ε-PL添加量较少,不足以引起膜厚度的变化[18]

L*a*b*和ΔE结果表明添加ε-PL显著降低了膜的亮度并使膜偏向黄绿色(P<0.05),随着ε-PL添加量增加,趋势更加明显,这主要是由于ε-PL本身为浅黄色[18]。PS-0.5膜ΔE值最大(5.22>5),表明此时膜的颜色变化可被肉眼识别[19]

不同ε-PL添加量的PS抗菌膜水接触角均<90°,表明膜为亲水膜[20]。随着ε-PL添加量从0%增加到0.5%,膜的水接触角由66.12°降低至57.79°,这是由于ε-PL是一种亲水性物质,可以提高PS膜的表面亲水性[9]。此外,由于ε-PL自身的亲水性,进一步增强了膜与水分子之间的相互作用[21],进而导致PS膜的水分含量随ε-PL的添加逐渐增加。

2.2.2 机械性能

如图4所示,PS-0的拉伸强度为35.22 MPa,断裂伸长率为9.50%。加入ε-PL后,膜的拉伸强度显著降低(P<0.05),断裂伸长率显著增加(P<0.05),PS-0.5的拉伸强度降低至28.87 MPa,断裂伸长率增加至16.20%。这可能是由于ε-PL的加入与基质之间形成氢键,削弱了膜基质内部的相互作用强度,进而降低了膜的拉伸强度,同时ε-PL的加入提高了膜的水分含量(表1),水作为增塑剂提高了膜的断裂伸长率,加强了膜的柔韧性[22],与FTIR结果一致。ZHUANG等[23]研究发现,添加ε-PL后羧甲基壳聚糖/明胶膜的拉伸强度降低,断裂伸长率提高,与本研究结果趋势相同。因此,添加ε-PL可显著提高PS膜的柔韧性,有利于膜在食品包装时保持包装完整性。

图4 膜的机械性能
Fig.4 Mechanical properties of films

注:同一指标的不同小写字母表示差异显著(P<0.05)(下同)。

2.2.3 阻隔性能

如图5所示,PS-0水蒸气透过率和氧气透过率分别为1.24×10-12 g·cm/(cm2·Pa·s)和0.66×10-10 g·cm/(cm2·s),随着ε-PL添加量增加,膜的水蒸气透过率和氧气透过率呈先降低后升高的趋势,当ε-PL添加量为0.4%时,PS-0.4膜的水蒸气透过率和氧气透过率达到最低,这是由于适量的ε-PL与成膜基质之间存在氢键相互作用,促成了网络结构的形成并抑制水分子和氧气的渗透[13],可以减少食品在包装过程中由于吸湿导致结块现象的出现。当ε-PL过多时会发生聚集并破坏PS抗菌膜的均匀性,缩短水分子和氧气在膜网络中的扩散路径,从而导致水蒸气透过率和氧气透过率上升[24]

图5 膜的水蒸气透过率和氧气透过率
Fig.5 Water vapor permeability and oxygen permeability of films

透光率是食品包装材料的重要性能指标之一,直接决定包装材料的紫外阻隔性能并影响包装食品的外观。如图6所示,添加ε-PL的PS抗菌膜透光率降低,这与PS抗菌膜的颜色加深有关(表1),其中在紫外光谱范围(200~400 nm)的透光率下降明显,可能是ε-PL中的不饱和键吸收紫外光导致[7]。因此,ε-PL的加入提高了膜对紫外线的阻隔性能,有利于食品的储存。

图6 膜的透光率
Fig.6 Transmittance of films

2.2.4 热封强度和溶解时间

热封强度是膜材料实现封闭式包装效果的关键性能指标,当膜的热封强度高于2.25 N/15 mm时,可满足膜密封的要求[25]。如图7所示,PS-0膜的热封强度为2.73 N/15 mm,随着ε-PL添加量增加,膜的热封强度保持在2.62~2.69 N/15 mm,与PS-0膜之间无显著差异(P>0.05)。李庆祥[26]研究鱼明胶/ε-PL/香芹酚抗菌复合膜的热封强度时观察到类似的现象。因此,ε-PL的添加对PS膜的热封强度无明显影响,可满足其作为食品热封包装的要求。

图7 膜的热封强度和溶解时间
Fig.7 Heat-seal strength and dissolution time of films

溶解性是衡量膜是否适合作为速溶食品包装的关键指标之一。如图7所示,不同ε-PL添加量的膜均可在30 s内溶解,且随着ε-PL添加量增加,膜溶解时间缩短,这可能是由于ε-PL的加入提高了PS膜的表面亲水性,增强了膜与水分子之间的相互作用进而提高膜的溶解性[13]。LIU等[12]研究发现,可溶性大豆多糖/明胶膜可在30 s内溶解于95 ℃的热水;LI等[27]研究发现,决明子胶/乙基纤维素膜在沸水中5 min的溶解率超过80%。本研究中添加ε-PL有助于提高PS膜的溶解性,其中,PS-0.4膜和PS-0.5膜可在25 s内完全溶解,表现出优异的速溶效果,具有作为速溶包装的应用潜力。

2.3 膜的抗菌活性

如图8-a所示,对照组和PS-0均未观察到抑菌圈,表明不具有抗菌活性。随着ε-PL添加量的增加,膜对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性逐渐增强,当ε-PL添加量由0.1%增加至0.4%时,膜对大肠杆菌的抑菌圈直径由6.61 mm增加到10.17 mm,对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径由6.03 mm增加到8.07 mm;继续增加ε-PL添加量,膜的抗菌效果无明显变化(P>0.05),方春姗等[28]在大豆分离蛋白改性膜中也发现了类似现象。此外,PS抗菌膜对大肠杆菌的抑制效果优于金黄色葡萄球菌,与汤秋冶等[29]对海藻酸钠抗菌复合膜的研究结果一致。结果表明,添加ε-PL可以提高PS膜的抗菌活性,当ε-PL添加量为0.4%时,PS-0.4抗菌效果最佳,有利于保证速溶食品在包装贮藏过程中的食用安全性。

a-抑菌圈照片;b-抑菌圈直径

图8 膜的抗菌活性
Fig.8 Antimicrobial activity of films

2.4 PS-0和PS-0.4包装蛋白肽粉的应用效果

2.4.1 包装外观及溶解时间

如表2所示,第0天时,PS-0组和PS-0.4组肽粉包装均密封性良好,包装肽粉颜色为白色,将肽粉连同包装投入水中,PS-0组在28 s左右溶解完全,而PS-0.4组可在23 s左右溶解完全,表明PS-0.4组速溶效果更好。贮藏30 d时,PS-0组的包装肽粉颜色为浅黄色,PS-0.4组外观没有发生明显改变,可能是因为PS组的包装肽粉吸湿较为严重。贮藏60 d时,PS-0组肽粉出现结块,PS-0.4组颜色略微发黄、无结块。申志翔[6]在玉米-小麦淀粉膜包装豆奶粉应用研究中也有类似发现。在贮藏期间,同一组中包装肽粉溶解时间无显著变化(P>0.05)。因此,与PS-0膜包装相比,PS-0.4速溶效果更佳,且可保持良好的包装和肽粉外观形态。

表2 贮藏过程中肽粉包装的外观及溶解时间
Table 2 Appearance and dissolution time of packaged peptide powder during storage

贮藏时间组别溶解时间/s外观0 dPS-028.33±0.48aPS-0.423.33±1.53a30 dPS-028.67±0.58aPS-0.424.33±0.58a60 dPS-028.33±1.15aPS-0.424.00±1.00a

2.4.2 吸湿率

如图9所示,PS-0组和PS-0.4组包装肽粉在贮藏过程中的吸湿率呈上升趋势。贮藏5 d时,PS-0组和PS-0.4组的包装肽粉质量发生细微变化,吸湿率分别为0.17%和0.15%。PS-0组肽粉包装从第15天开始吸湿率显著增加(P<0.05),第60天时达到4.20%。与PS-0组相比,PS-0.4组的肽粉包装吸湿率较为缓慢,在第60天时为2.06%。这可能是由于添加ε-PL后降低了抗菌膜的水蒸气透过率及透氧率,阻止了更多的水分子进入肽粉包装内部。结果表明,PS-0.4组比PS-0组具有更好的阻湿性能。

图9 包装肽粉在贮藏过程中的吸湿率
Fig.9 Moisture absorption rate of packaged peptide powder during storage

2.4.3 菌落总数

如图10所示,第0天时,PS-0组和PS-0.4组中膜和肽粉菌落总数均为0。在贮藏过程中,PS-0组的膜和包装肽粉分别在第5天和第15天检测到微生物,随后菌落总数逐渐上升,第60天分别达到3.94 lg CFU/g和3.39 lg CFU/g,这可能是由于PS-0组无抗菌活性,且其高吸湿率有利于微生物生长。与PS-0组相比,PS-0.4组的膜和包装肽粉分别在第25天和第60天检测到微生物,第60天的菌落总数分别为2.68 lg CFU/g和2.05 lg CFU/g,均低于PS-0组。因此,PS-0.4膜可有效降低包装本身及包装物滋生微生物的风险。

图10 包装肽粉和包装膜在贮藏过程中的菌落总数
Fig.10 The total plate count of packaged peptide powder and films during storage

3 结论与讨论

目前,大多数方便食品都采用由不可再生化石资源生产的塑料包装,导致环境污染并对消费者健康带来威胁。此外,塑料包装的机械强度和热封强度较高,在食用时封口难以撕开,食用时无法完全取出造成食物浪费。多糖基可食膜具有良好的水溶性、降解性、热封性、阻隔性等优点,但多糖易作为微生物碳源滋生病菌,进而影响食品品质[5]。ε-PL是微生物代谢生产的一种具有广谱抗菌性的肽,可以通过静电吸引力导致微生物死亡,在食品包装上得到广泛应用[7]。如RASHID等[30]将ε-PL添加到普鲁兰多糖/壳聚糖膜中,可以有效延长冷鲜牛肉的货架期。

本文探究了ε-PL添加量对PS膜性能的影响,并评价了其在肽粉包装上的应用效果。由于ε-PL添加量较少,未显著改变PS膜的厚度,这一结果与HE等[18]研究结果一致;FTIR和XRD图谱表明,ε-PL与成膜基质之间存在氢键相互作用,进而提高了阻隔性能,这可以有效减少食品贮藏过程中出现结块现象;作为一种亲水性物质,ε-PL的添加提高了PS膜的断裂伸长率、水分含量、表面亲水性及溶解性,具有良好的柔韧性及速溶性,可以作为速溶包装进行应用。PS-0.4和PS-0.5具有相似的热封强度、溶解性和抗菌活性,但PS-0.5因ε-PL添加量过高导致表面和截面出现颗粒状聚集,相比之下PS-0.4的微观结构光滑致密,对水蒸气和氧气的阻隔性能更强,更具速溶食品包装的应用潜力。应用实验结果进一步表明,PS-0.4包装肽粉可在25 s内溶解,与PS-0膜相比,PS-0.4膜在60 d贮藏时间内可有效降低包装的吸湿率,且有效抑制包装膜及肽粉被微生物污染。综上所述,PS-0.4膜更具有作为速溶食品包装的应用潜力,可以延缓肽粉在贮藏期间的品质变化。本研究拓展了PS膜的应用潜力,并为多糖基抗菌包装在速溶食品中的应用提供了重要参考。作为一种便携式速溶包装,PS抗菌膜在调味品内包装、载药口腔速溶膜及方便速食包装方面具有一定应用潜力。在后续实验中将探究PS抗菌膜在粉状食品及油脂类食品包装上的应用研究,并尝试对药品进行负载,测试其缓释效率,对PS抗菌膜的应用进行深入研究,拓宽应用范围。

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Preparation and application research of pullulan-soluble soybean polysaccharide antimicrobial film

ZHAO Fan1, JIANG Lijun2, LI Shuangdie1, WANG Chenyu2, SUN Di1, LIU Yu1,2*, JIANG Wei1,2*

1(National Engineering Research Center for Marine Aquaculture, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China)
2(College of Food and Pharmacy, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China)

ABSTRACT At present, as a potential packaging material, the properties of edible film need to be improved.To improve the antimicrobial activity and application potential of pullulan-soluble soybean polysaccharide (PS) heat-sealable film, the PS antimicrobial films loaded with ε-polylysine hydrochloride (ε-PL) were prepared.The effects of the addition of ε-PL on the structure, physics properties and antimicrobial activity of PS antimicrobial film were explored, and the application of PS antimicrobial film for packaging peptide powder was further evaluated.The results indicated that ε-PL interact with the film-forming matrix by hydrogen bonds.After adding ε-PL to PS film, the moisture content, elongation at break, barrier property and antimicrobial activity increased, and the water contact angle, tensile strength, dissolution time and transmittance decreased, while had no significant effect on the heat seal strength and thickness.When 0.4% ε-PL was added, the PS antimicrobial film (PS-0.4) had a uniform and dense surface, short dissolution time, the best antimicrobial activity and barrier properties.The results of packaging peptide powder showed that PS-0.4 film could effectively inhibit the moisture absorption rate and the total plate count of peptide powder packaging, allowing for the packaged peptide powder to dissolve within 25 s.In summary, a heat-sealable and instantly dissolvable antimicrobial film with good application potential is prepared to provide packaging material support for portable instant hot and instantly dissolvable convenience foods.

Key words antimicrobial activity;pullulan-soluble soybean polysaccharide film;quick-dissolving;heat-seal;moisture adsorption

DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.039079

引用格式:赵璠,江李君,李双蝶,等.普鲁兰多糖-可溶性大豆多糖抗菌膜的制备及应用研究[J].食品与发酵工业,2025,51(3):162-170.ZHAO Fan, JIANG Lijun, LI Shuangdie, et al.Preparation and application research of pullulan-soluble soybean polysaccharide antimicrobial film[J].Food and Fermentation Industries,2025,51(3):162-170.

第一作者:硕士研究生(刘宇助理研究员和姜维研究员为共同通信作者,E-mail:liuyu1987@zjou.edu.cn;jiangw@zjou.edu.cn)

基金项目:浙江省基础公益研究计划项目(TGN23C200051);国家重点研发计划项目(2023YFD2401501);定海区科技计划项目(2022C31007);浙江省教育厅一般科研项目(Y202250593)

收稿日期:2024-03-04,改回日期:2024-03-25