新型抗菌肽Temporin-SHf在毕赤酵母中的表达及诱导条件优化

doi:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023811

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摘要抗菌肽Temporin-SHf是一类具有广谱抗微生物活性的小分子多肽,该研究利用毕赤酵母表达抗菌肽Temporin-SHf。构建pPIC9K-Temporin-SHf表达载体,转化至毕赤酵母 GS115,经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)验证,并对获得的阳性转化子进行诱导条件优化和体外抑菌活性检测分析。结果表明,新型抗菌肽Temporin-SHf在毕赤酵母GS115中成功表达,使用甲醇终体积分数0.5%,诱导菌体起始浓度OD₆₀₀为1.5,温度28 ℃,诱导72 h,分泌蛋白表达量最高,分泌表达的抗菌肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较强抑菌活性。该研究首次在毕赤酵母中表达新型抗菌肽Temporin-SHf,并优化了其诱导条件,为下一步工业生产提供参考。

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	王莲哲
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关键词: 抗菌肽 Temporin-SHf 毕赤酵母表达抑菌活性

Abstract: Temporin-SHf is a kind of small molecular peptide with broad-spectrum antimicrobial activity, the expression of Temporin-SHf in Pichia pastoris could provide reference for its industrial production. The pPIC9K-Temporin-SHf expression vector was constructed and transformed into P. pastoris GS115 strain, which was then verified by PCR and RT-PCR, and the induction conditions were optimized and antibacterial activity was analyzed in vitro. The results showed that the antimicrobial peptide Temporin-SHf was expressed successfully in P. pastoris, which had antibacterial activity on Staphylococcus aureus and Escherichia coli strains. And the optimum expression conditions of Temporin-SHf were as follows: temperature 28 ℃, initial induction OD₆₀₀=1.5, adding 0.5% (volume fraction) methanol, and induced for 72 h. In this study, a novel antimicrobial peptide Temporin-SHf was expressed in P. pastoris for the first time and the induction conditions were optimized, which provided theoretical base for the industrial production.

Key words: antimicrobial peptides Temporin-SHf Pichia pastoris expression antibacterial activity

收稿日期: 2020-03-02 出版日期: 2020-07-25 发布日期: 2020-08-17 期的出版日期: 2020-07-25

基金资助: 河南省高等学校重点科研项目计划(19A180011)

作者简介: 博士,讲师(洪军副教授为通讯作者,E-mail:hongjun@hncj.edu.cn)

引用本文:

王莲哲,江宏浩,唐宜飞,等. 新型抗菌肽Temporin-SHf在毕赤酵母中的表达及诱导条件优化[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(14): 98-102.
WANG Lianzhe,JIANG Honghao,TANG Yifei,et al. Expression of novel antibacterial peptide Temporin-SHf in Pichia pastoris and optimization of induction conditions[J]. Food and Fermentation Industries, 2020, 46(14): 98-102.

链接本文:

http://sf1970.cnif.cn/CN/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023811 或 http://sf1970.cnif.cn/CN/Y2020/V46/I14/98

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