硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A, CSA)是关节软骨修复中不可或缺的重要成分。CSA由软骨素4-O-磺基转移酶-1(chondroitin 4-O-sulfotransferase-1, C4ST-1)催化软骨素中N-乙酰氨基半乳糖胺(N-acetylgalactosamine, GalNAc)4号位羟基磺酸化合成。然而,由于C4ST-1酶活性较低,其催化能力受限,进而阻碍了CSA的工业化生产进程。为此,该研究旨在通过结合重组菌构建和培养基优化提升C4ST-1酶活性。首先在筛选确定了以毕赤酵母GS115为底盘细胞的基础上,进一步优化了以OST1-α分泌信号肽和SUMO Pro 3促溶标签的组合方式进行C4ST-1分泌表达,经摇瓶发酵C4ST-1最高酶活性为1 889.2 U/L。鉴于前期研究发现无机盐对C4ST-1酶活性的抑制以及现有培养基成本较高问题,该研究通过优化培养基组分,发现不添加昂贵成分酵母无氨基氮源(yeast nitrogen base without amino acids, YNB)时,C4ST-1酶活性较原培养基提高68.4%。此外,结合碳源、其他氮源以及生物素的筛选与优化使C4ST-1酶活性进一步提高。最终,在5L发酵罐补料分批发酵72 h时,获得最高酶活性为5 040.7 U/L。该研究不仅为CSA规模化生产奠定了基础,也将为其他糖胺聚糖(如肝素、硫酸皮肤素)合成所需的磺基转移酶发酵生产提供借鉴。
为了筛选具有协同作用的乳酸菌并从代谢产物角度探究乳酸菌协同作用的机理,通过测定乳酸菌单独及混合培养的生长情况、乳酸和游离氨基氮代谢物的产量、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)关键酶活性及转录水平等指标评价乳酸菌的相互作用关系,进一步利用非靶向代谢组学技术探究乳酸菌之间的协同作用机理。结果表明,植物乳植杆菌HC 1775(Lactiplantibacillus plantarum HC 1775,Lpl)和鼠李糖乳酪杆菌GG HC 1509(Lacticaseibacillus rhamnosus GG HC 1509,LGG)混合培养后细菌数量明显增加,乳酸含量达到71.20 μg/mL,较Lpl、LGG单独培养增加了23.52%、38.68%,氨基氮含量为64.68 μg/mL;添加无细胞上清液后Lpl活菌数增加了23.70%,LGG增加了32.83%;ldh基因对Lpl+LGG混合菌调控明显,ldh表达量为单菌的2.15倍,Lpl和LGG之间具有相互促进生长的协同作用;非靶向代谢组学分析表明,Lpl+LGG混合培养代谢特征谱与单菌间存在显著差异,代谢物丰度较高,其中天冬氨酸、苏氨酸等氨基酸类物质为关键差异代谢物。Lpl和LGG间存在协同作用,混合培养体系中氨基酸类物质显著增加影响了乳酸菌间的代谢,乳酸菌协同培养研究为乳酸菌的应用提供了坚实的理论基础。
果冻作为重要休闲食品,其感官品质直接影响消费者选择。精准识别并优化关键感官属性是提升产品竞争力的关键。该研究以9种品牌果冻为研究对象,通过定性、定量消费者测试[喜好度检验、检查所有适用法(check all that apply,CATA)和最适标尺法(just about right,JAR)]以及评价小组的定量描述性分析,确定了果冻产品的关键感官属性和关键属性的理想强度范围。结果表明,感官属性是驱动果冻消费的主要动机(P<0.05),其中口感(r=0.70)对整体喜好度的贡献大于风味(r=0.55)。CATA测试表明消费者最关注的属性为弹性、咀嚼性、易碎性和韧性。JAR测试验证了硬度、弹性、咀嚼性、凝聚性和韧性的不足或过强将使得消费者喜好度明显降低。结合JAR数据和描述性分析结果,确定关键质地属性理想强度范围(0~15分标度)为:硬度接近果冻条标样(8分):7.15~8.25分;弹性、咀嚼性均略大于布丁标样(8分、7分),分别为8.45~9.00分、7.5~9.00分;凝聚性介于果冻条标样(7分)与QQ糖标样之间(12分):7.5~10.00分;韧性则介于布丁(4分)与果冻条(7分)之间:5.66~7.15分。
该研究通过顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术(headspace-solid phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)和高通量测序技术系统解析了3种大曲的特征香气化合物及微生物群落结构。研究发现,3种大曲分为以吡嗪类或以酯类化合物为主体风味两类。采用多元统计分析并根据变量投影重要性指标(variable importance in the projection,VIP)分析共鉴定出31种特征香气化合物。利用高通量测序技术对大曲的细菌群落结构进行解析,结合相关性分析,从多个维度判定了其核心微生物为火山渣芽孢杆菌属(Scopulibacillus)和芽孢杆菌属(Bacillus),其与多种吡嗪类、酚类、醇类等特征风味物质显著相关。通过分离培养及固态发酵实验探究其风味代谢能力,核心微生物的应用结果表明大曲细菌菌群的生物量及吡嗪类化合物的含量明显提升,改变了大曲的香气组成,进一步证实了其对大曲主体风味的调控功能。该研究在实现大曲风味定向调控、提升白酒品质方面具有重要意义。