渗透压诱导表达重组Clostridium thermosulfurogenes β-淀粉酶基因

doi:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2011.06.002

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摘要以热硫梭菌Clostridium thermosulfurogenes基因组为模板,PCR扩增出β-淀粉酶基因;将该基因克隆到pET-22b(+)载体上,转入大肠杆菌BL21-SI,采用NaCl形成的高渗透压诱导表达。研究了不同诱导条件对重组菌产β-淀粉酶的影响,结果以菌体密度达到OD600为0.6,诱导剂NaCl浓度为0.6 mol/L,诱导温度为35℃最佳。重组菌以LBON为培养基分批发酵时,由于营养限制,菌体密度OD600仅为4.60,β-淀粉酶活力为118U/mL。采用pH-Stat分批补料发酵时,在菌体密度仅是分批发酵的2.35倍的条件下,得到6.12倍的产酶量,酶活力达722U/mL。重组β-淀粉酶70℃水解可溶性淀粉3h的麦芽糖转化率为62.2%,高于大麦β-淀粉酶的转化率。

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关键词: 渗透压启动子诱导热硫梭菌 β-淀粉酶表达

Abstract: A β-amylase gene from Clostridium thermosulfurogenes was cloned and heterologously expressed in Escherichia coli BL 21-SI.The influences of cell density at induction,temperature,and NaCl concentration were studied.The optimum condition of induction was at cell density of OD600,=0.6,temperature of 35 ℃,and NaCl concentration of 0.6M.The expression of recombinant β-amylase reached 118U/ mL in a 20L batch culture.In a 20L pH-Stat fed-batch culture,the cell density and enzyme activity were 2.35 times and 6.12 times of those obtained in batch culture.The soluble starch was converted to maltose by recombinant β-amylase and the conversion ratio was 62.2% after 3h reaction at 70℃.

Key words: Pro U promoter induction Clostridium thermosulfurogenes β-amylase expression

出版日期: 2011-06-25 发布日期: 2011-06-25 期的出版日期: 2011-06-25

引用本文:

蒙健宗,梁莲华,周礼芹,等. 渗透压诱导表达重组Clostridium thermosulfurogenes β-淀粉酶基因[J]. 食品与发酵工业, 2011, 37(06): 6-10.
Meng Jian-zong,Liang Lian-hua,Zhou Li-qin,et al. Overexpression of Recombinant Clostridium thermosulfurogenes β-amylase in Osmotically Inducible Escherichia coli[J]. Food and Fermentation Industries, 2011, 37(06): 6-10.

链接本文:

http://sf1970.cnif.cn/CN/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2011.06.002 或 http://sf1970.cnif.cn/CN/Y2011/V37/I06/6

[1]	赵雨, 郭建华, 张春枝. 蜡状芽孢杆菌ZY12产磷脂酶D的影响因素[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(9): 57-62.
[2]	李丽, 杨云丽, 杨小凡, 何伟, 袁恺, 朱威宇, 彭超, 何一凡, 董银卯, 周卫强. 液体发酵生产灵芝三萜酸的过程调控研究进展[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(8): 304-312.
[3]	高宇豪, 吴勇杰, 朱亚鑫, 付静, 徐建国, 王松涛, 徐国强, 张晓梅, 史劲松, 许正宏. 产谷胱甘肽毕赤酵母工程菌的构建及能量调控[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(7): 21-26.
[4]	彭燕鸿, 苏爱秋, 黄伟文, 蓝素桂, 杨天云, 谭强. 微生物嗜热脂肪酶研究进展[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(6): 289-294.
[5]	宋婷, 王帅静, 汪沉, 吕育财, 罗华军, 郭金玲, 龚大春. 近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR的表达及酶学性质研究[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(3): 18-24.
[6]	叶德晓, 黄佳俊, 卢宇靖, 林育成, 李慧灵, 谭景航, 周金林. α-L-鼠李糖苷酶AnRhaE在毕赤酵母中的表达及应用[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(3): 25-30.
[7]	李静竹, 胡梦君, 张建华. 蛋白质谷氨酰胺酶的重组表达与发酵条件优化[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(3): 294-301.
[8]	蔡亚文, 张暄, 陈鸥, 邓丽莉, 曾凯芳. Pichia galeiformis对李果实褐腐病的生防效果及诱导抗病性的机制研究[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(2): 87-94.
[9]	楼志华, 刘翔, 张劲楠. 嗜糖假单胞菌麦芽四糖酶基因在地衣芽孢杆菌中的异源表达[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(1): 50-54.
[10]	董晨阳, 张红星, 贾宇, 谢远红, 刘慧, 金君华. 唾液乳杆菌M18-6体外抗氧化功能评价及其机制探讨[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(1): 132-137.
[11]	魏万涛, 李梦丽, 江波, 张涛. L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶的克隆表达及酶学性质研究[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(9): 18-24.
[12]	张大伟, 刘德华, 黄钦钦, 田亚平. *食品级高产亮氨酸氨肽酶重组Bacillus subtilis的构建和发酵优化*[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(8): 1-6.
[13]	郭宵, 安亚静, 柴成程, 路福平, 刘夫锋. 大肠杆菌分泌表达裂解性多糖单加氧酶发酵条件的优化[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(5): 31-37.
[14]	顾鹏帅, 潘梅, 丁亮亮, 唐蕾. 共表达谷氨酰-tRNA还原酶增强染料脱色过氧化物酶在大肠杆菌中的表达活性[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(4): 45-50.
[15]	郑亚伦, 夏瑛, 李良, 董孝元, 方尚玲, 陈茂彬, 李琴. 源于解淀粉芽孢杆菌酸性木聚糖酶酶学性质的研究[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(24): 58-65.