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| 黄曲霉寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在工业酿酒酵母CICC1346中的表达 |
| 康小龙,吕晓静,黄清媚,熊春江,林蒋海,肖文娟,刘泽寰 |
| 暨南大学生命科学技术学院,生命与健康工程研究院分子生物研究中心,广东广州,510632 |
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| Cloning and expression of oligo-1,6-glucosidase from Aspergillus flavus in industrial Saccharomyces cerevisiae CICC 1346 |
| KANG Xiao-long,LV Xiao-jing,HUANG Qing-mei,XIONG Chun-jiang,LIN Jiang-hai,Xiao Wen-juan,Liu Ze-huan |
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摘要 通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension,SOE-PCR)扩增黄曲霉寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因和酿酒酵母α-信号肽序列,定向重组到整合型表达载体pδRCMB中,并在CICC1346中实现分泌表达;然后通过同源建模、利用分子模拟软件Discovery Studio 4.1分析其蛋白结构,以对硝基苯-α-D-葡萄糖吡喃苷(pNPG)为底物,建立并确定酶活反应条件,并进行纯化、酶学性质分析;将密码子优化后序列在CICC1346中实现分泌表达,利用淀粉进行共发酵实验.结果显示:重组酶突变后相对野生型蛋白结构无影响.SDS-PAGE分析重组重组酶大小约为70 kDa;优化后最高酶活达到0.69 U/mL,重组酶最适pH为6.5,在pH4.5.0 ～ 7.0维持90％以上的酶活;最适温度为40℃,在30 ～ 40℃维持接近100％的酶活;受Cu2+和MR2+严格抑制;寡聚-1,6-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶及糖化酶协同利用淀粉产乙醇,提高淀粉水解效率.这是首次报道黄曲霉的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母整合型分泌表达.
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出版日期: 2016-08-25
发布日期: 2017-12-01
期的出版日期: 2016-08-25
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2016, Vol. 42 
