热稳定性磷脂酶生产菌的分离鉴定及酶学性质研究

doi:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2014.05.015

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摘要采用卵黄平板法从不同来源土壤样品中分离到25株磷脂酶生产菌株,经复筛得到1株磷脂酶产量较高的菌株JYSY1。根据培养特征、生理生化分析及16S rDNA序列同源性分析,初步鉴定菌株JYSY1为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。该菌最适生长及产酶温度分别为25℃、30℃,最适生长及产酶初始pH值均为7.0。采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换、Sephadex G-100凝胶层析从菌株JYSY1的发酵上清液中分离纯化了磷脂酶,其分子质量约为48 kDa,最适作用温度为50℃,最适作用的pH为8.0,Co2+和Ca2+对酶促反应有促进作用,酶活力分别提高到111.59%和110.11%。Zn2+、Mg2+对酶有一定的抑制作用。SDS、PMSF、EDTA、EGTA均对酶有一定的抑制作用,该酶热稳定性较好,65℃下酶活力能保持55%以上,纯化的酶是一金属磷脂酶,属于磷脂酶C。

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关键词: 磷脂酶筛选纯化酶学性质

Abstract: Twenty-five phospholipase-producing strains were isolated from the soil samples collected in different regions by the method of egg yolk plate. One strain JYSY1 was selected for the high growth and production of phospholipases. The strain JYSY1 was preliminarily identified as Bacillus cereus based on the morphological characteristics,physiological and biochemical analysis,and sequence analysis of 16S rDNA. The optimum temperature for cell growth and phospholipase production were 25 ℃ and 30 ℃. The optimum pH value for the cell growth and phospholipase production was pH 7. 0. A phospholipase was purified from the culture supernatant of the strain JYSY1 by means of ammonium sulfate precipitation,column chromatography on DEAE-Sepharose Fast Flow and SephadexG100. The enzyme appeared to be a single peptide of 48 kDa. The optimal temperature and pH for the enzyme reactivity were 50 ℃ and 8. 0,respectively. Addition of Co2 +and Ca2 +increased its activity to 111. 59% and 110. 11%respectively,but Zn2 +and Mg2 +respectively inhibited the enzymatic activity. Addition of 1mmol /L of PMSF,SDS,EGTA and EDTA also inhibited the enzymatic activity. At 65 ℃,about 55% enzyme activity was remained. The purified enzyme was identified to be a phospholipase C. The enzyme was suggested to be a metallophospholipase.

Key words: phospholipase strains screening purification enzymic properties

出版日期: 2014-05-25 发布日期: 2014-05-25 期的出版日期: 2014-05-25

引用本文:

杨艳艳,陈吉祥,杨智,等. 热稳定性磷脂酶生产菌的分离鉴定及酶学性质研究[J]. 食品与发酵工业, 2014, 40(05): 48-54.
YANG Yan-yan,CHEN Ji-xiang,YANG Zhi,et al. Studies on screening of a thermostable phospholipase producing bacterium and its enzyme characterizatics[J]. Food and Fermentation Industries, 2014, 40(05): 48-54.

链接本文:

http://sf1970.cnif.cn/CN/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2014.05.015 或 http://sf1970.cnif.cn/CN/Y2014/V40/I05/48

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