Please wait a minute...
 
 
食品与发酵工业  2020, Vol. 46 Issue (11): 46-51    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023272
  研究报告 本期目录 | 过刊浏览 | 高级检索 |
乳酸乳球菌NZ9000中增强型绿色荧光蛋白报告系统的构建
刘璐, 艾连中, 夏永军, 熊智强, 管彤, 宋馨*
(上海理工大学 医疗器械与食品学院,上海食品微生物工程研究中心,上海,200093)
A reporter system with the enhanced green fluorescent protein inLactococcus lactis NZ9000
LIU Lu, AI Lianzhong, XIA Yongjun, XIONG Zhiqiang, GUAN Tong, SONG Xin*
(Shanghai Engineering Research Center of Food Microbiology, School of Medical Instrument and Food Engineering,University of Shanghai for Science and Technology, Shanghai 200093, China)
下载:  HTML   PDF (1767KB) 
输出:  BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein, eGFP)基因是遗传操作系统中常用的报告基因,以eGFP为报告基因评价不同启动子在乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000中的调控能力,寻找能够高效表达外源蛋白的强启动子。以实验室构建的携带eGFP基因的pIB184-eGFP质粒为载体,PCR扩增来源于pLpCas9-0537、pMG36e、pNZ44的启动子P11、P32、P44,将其分别克隆至pIB184-eGFP上,构建基于eGFP的报告系统。酶标仪定量测定eGFP的表达强度,比较不同启动子的转录活性。结果表明,在乳酸乳球菌中启动子P11转录的活力十分微弱,启动子P23、P32、P44的转录活性分别比P11高约23.9、7.8、4.1倍。该文利用基于eGFP的报告系统,筛选出适用于乳酸乳球菌中不同转录活性的启动子,为外源基因在乳酸乳球菌中的表达奠定了基础。
服务
把本文推荐给朋友
加入引用管理器
E-mail Alert
RSS
作者相关文章
刘璐
艾连中
夏永军
熊智强
管彤
宋馨
关键词:  乳酸菌  乳酸乳球菌  增强型绿色荧光蛋白  报告系统  启动子    
Abstract: The convenience and high efficiency make the enhanced green fluorescent protein (eGFP) widely used as a reporter in genetic manipulation. In order to screen strong promoters with high transcriptional activity in Lactococcus lactis NZ9000, a report system based on eGFP was constructed. Four promoters, including P11, P23, P32 and P44 were compared. The fragments of promoters P11, P32 and P44 were amplified by PCR using pLpCas9-0537, pMG36e or pNZ44 as template and cloned into pIB184-eGFP, respectively. The transcriptional activity of different promoters was compared by quantitative assay of eGFP using microplate reader. Quantitative assay of the fluorescence intensity showed the transcription activity of P11 was weak, and that of P23, P32 and P44 was 23.9, 7.8 and 4.1 times higher, respectively. Taken together, promoters with different transcriptional activity were screened out using the eGFP-based reporting system, which could be used as a basic tool for heterogenous gene expression in L. lactis.
Key words:  lactic acid bacteria    Lactococcus lactis    enhance green fluorescent protein(eGFP)    reporting system    promoter
收稿日期:  2020-01-06                出版日期:  2020-06-15      发布日期:  2020-06-24      期的出版日期:  2020-06-15
基金资助: 国家自然科学基金(31972101);上海市科技兴农重点攻关项目(2019-02-08-00-07-F01152)
作者简介:  硕士研究生(宋馨讲师为通讯作者,E-mail:daohongxuan@126.com)
引用本文:    
刘璐,艾连中,夏永军,等. 乳酸乳球菌NZ9000中增强型绿色荧光蛋白报告系统的构建[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(11): 46-51.
LIU Lu,AI Lianzhong,XIA Yongjun,et al. A reporter system with the enhanced green fluorescent protein inLactococcus lactis NZ9000[J]. Food and Fermentation Industries, 2020, 46(11): 46-51.
链接本文:  
http://sf1970.cnif.cn/CN/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023272  或          http://sf1970.cnif.cn/CN/Y2020/V46/I11/46
[1] 李全阳, 夏文水. 乳酸菌胞外多糖的研究[J]. 食品与发酵工业, 2003, 29(5): 86-90.
[2] 张金宝, 乌云塔娜. 乳酸菌食品级高效表达载体系统的研究进展[J]. 畜牧兽医杂志, 2008, 27(6): 42-44.
[3] 张虎成. 乳酸菌表达系统的初步构建及应用[D]. 北京: 中国人民解放军军事医学科学院, 2007.
[4] 贡汉生, 孟祥晨. 乳酸菌细菌素分类与作用机制[J].食品与发酵工业, 2008, 34(1): 105-109.
[5] 程璐, 缪铭, 张涛, 等. 食品生物防腐剂——抗真菌乳酸菌研究进展[J]. 食品与发酵工业, 2010, 36(9): 129-133.
[6] ZHU D, LIU F, XU H, et al. Isolation of strong constitutive promoters from Lactococcus lactis subsp. lactis N8[J]. FEMS Microbiology Letters, 2015, 362(16): 1-6.
[7] MORELLO E, L G BENMUDEZ-HUMARAN, LLULL D, et al. Lactococcus lactis, an efficient cell factory for recombinant protein production and secretion[J]. Journal of Molecular Microbiology & Biotechnology, 2008, 14:48-58.
[8] GU Q, SONG D, ZHU M. Oral vaccination of mice against Helicobacter pylori with recombinant Lactococcus lactis expressing urease subunit B[J]. FEMS Immunology & Medical Microbiology, 2009, 56(3): 197-203.
[9] SONG A L, INL LA, LIM SHE, et al. A review on Lactococcus lactis: from food to factory[J]. Microbial Cell Factories, 2017, 16(1): 1-15.
[10] 孙海烨, 张梁, 李由然, 等. 利用增强型绿色荧光蛋白研究不同启动子在乳酸克鲁维酵母中的功能[J]. 生物技术通报, 2017, 33(6): 197-206.
[11] 肖红庆, 李晓薇, JAMEEL A, 等. 人工合成启动子的应用[J].农业与技术, 2018, 38(9): 20-23.
[12] 韦云莹, 王立峰, 熊智强, 等. 响应面法优化乳酸乳球菌电转化效率研究[J]. 上海理工大学学报, 2018, 40(6): 566-571.
[13] 宋馨. 干酪乳杆菌遗传操作系统建立及胞外多糖合成关键基因解析[D]. 上海: 上海理工大学, 2018.
[14] KLEEREBEZEM M, BEERTHUYZEN M M, VAUGHAN E E, et al. Controlled gene expression systems for lactic acid bacteria: transferable Nisin-inducible expression cassettes for Lactococcus, Leuconostoc, and Lactobacillus spp.[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1997, 63(11):4 581-4 584.
[15] DE V W M. Gene expression system for lactic acid bacteria[J].Current Opinion in Microbiology, 1999, 2(3): 289-295.
[16] 王巧惠, 王光强, 宋馨, 等. 不同质粒电转三种乳酸菌的比较研究[J]. 工业微生物, 2016, 46(1): 36-41.
[17] SONG X, XIONG Z Q, KONG L H, et al. Relationship between putative eps genes and production of exopolysaccharide in Lactobacillus casei LC2W[J]. Frontiers in Microbiology, 2018, 9:1-9.
[18] 于泽. 基于乳酸菌自身分泌蛋白的组成型强启动子探测及功能分析[D]. 哈尔滨: 东北农业大学, 2013.
[19] 秦思. 基于短乳杆菌SlpA启动子的组成型表达载体构建及其活性分析[D]. 哈尔滨: 东北农业大学, 2013.
[20] VOSSEN J M V D, LELIE D V D, VENEMA G. Isolation and characterization of Streptococcus cremoris Wg2-specific promoters[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1987, 53(10):2 452-2 457.
[1] 张波, 谢广发, 李国龙, 孙国昌, 金建明, 朱炜俊, 刘菊. 黄酒生物酸化浸米与浸米浆水的利用[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(7): 168-174.
[2] 梁鑫, 陈思雨, 赵育, 雷钰, 孔倩倩, 万欣, 张宝善. 乳酸菌和酵母菌发酵红枣汁工艺优化及成分分析[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(7): 175-182.
[3] 吴小艳, 刘文星, 刘忠义, 李希宇, 付满, 李汀. 芒果酸奶发酵及后熟过程中乳酸菌素的产生及其抑菌作用[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(7): 183-188.
[4] 熊蝶, 袁岚玉, 李媛媛, 范鹏飞, 冯武. 陕西泡菜中降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选及其发酵特性与耐受性研究[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(6): 139-144.
[5] 邢晓莹, 刘毅, 张怀敏, 李江涌, 王如福. 山西老陈醋醋酸发酵过程中优良产酸菌株的筛选及鉴定[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(6): 201-207.
[6] 王曼, 杨琛, 覃晓玉, 康孟杰, 郝桂芳, 王承明. 鲊肉粉中乳酸菌和葡萄球菌的筛选及鉴定[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(5): 22-27.
[7] 宁亚维, 侯琳琳, 于同月, 刘茁, 杨正, 王志新, 贾英民. UPLC-MS/MS法快速测定乳酸菌发酵食品中的苯乳酸[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(5): 174-179.
[8] 史巧, 刘毕琴, 汤回花, 王馨蕊, 朱力舟, 赵楠, 李宏. 发酵蔬菜菌种应用及菌群调控研究进展[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(5): 273-281.
[9] 李娜, 崔梦君, 马佳佳, 雷炎, 郭壮, 张振东. 基于Illumina MiSeq测序和传统可培养方法的洪湖鲊广椒乳酸菌多样性研究[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(4): 110-115.
[10] 盖昱梓, 孙静娴, 黄刚, 金刚. 苹果酸-乳酸发酵细菌乙醇胁迫应答机制研究进展[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(3): 288-293.
[11] 李静竹, 胡梦君, 张建华. 蛋白质谷氨酰胺酶的重组表达与发酵条件优化[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(3): 294-301.
[12] 石佳佳, 齐天翊, 张萌, 陈淋霞, 张笛, 包智华. 自制酵素中乳酸菌群动态分析及对重金属的吸附积累特性[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(1): 14-20.
[13] 赵羽, 陆林, 刘小鸣, 崔树茂, 唐鑫, 陈卫, 赵建新. 基于蔗糖利用能力对豆乳发酵菌株的筛选及其应用[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(9): 43-49.
[14] 李丹阳, 李宇辉, 高云云, 闫艺, 王俊钢, 卢士玲. 新疆哈萨克族风干肉中产蛋白酶乳酸菌的筛选及酶学特性研究[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(9): 57-63.
[15] 胡锦鹏, 吴曼铃, 时瑞, 陈丽娇, 梁鹏, 程文健. 乳酸菌在发酵鱼制品加工中的应用研究概述[J]. 食品与发酵工业, 2020, 46(9): 285-289.
No Suggested Reading articles found!
Viewed
Full text


Abstract

Cited

  Shared   
  Discussed   
版权所有 © 《食品与发酵工业》编辑部
地址:北京朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼111室
本系统由北京玛格泰克科技发展有限公司设计开发  技术支持:support@magtech.com.cn