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食品与发酵工业  2019, Vol. 45 Issue (4): 193-199    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018815
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反转录-环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌
丁梦璇1, 刘秀1*, 刘伯扬2*, 梁玉林1, 周振森1, 尹建军1, 宋全厚1
1(中国食品发酵工业研究院有限公司,北京,100015)
2(内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司,质量安全管理系统中心实验室,内蒙古 呼和浩特,011517)
Rapid detection of Shigella sp. by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification
DING Mengxuan1, LIU Xiu1*, LIU Boyang2*, LIANG Yulin1, ZHOU Zhensen1, YIN Jianjun1, SONG Quanhou1
1(China National Research Institute Food & Fermentation Industries, Beijing 100015, China)
2(Inner Mongolia Mengniu Dairy (Group) Co.,Ltd, Hohhot 011517, China)
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摘要 建立了反转录-环介导等温扩增技术的志贺氏菌快速检测方法。针对志贺氏菌特异保守基因ipaH设计多套引物,建立优化了的反应体系,并评价其准确性、特异性、灵敏度。以人工污染脱脂乳样品比较RT-LAMP与RT-PCR的灵敏度。结果表明,在65 ℃等温条件下, RT-LAMP反应可在30 min内完成。在活菌/损伤菌模型中,该方法表现出比国标法更好的准确性。在23株细菌标准菌株中仅对4株志贺氏菌有特异性检出。志贺氏菌RNA模板的检测灵敏度为7 fg/μL。人工污染脱脂乳样品检测灵敏度达到40 CFU/g,比RT-PCR方法高出2个数量级。表明所建立的志贺氏菌RT-LAMP扩增方法可以准确的检测志贺氏菌,同时具有快速、特异、灵敏的优势,可用于志贺氏菌的快速筛查和现场监控。
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丁梦璇
刘秀
刘伯扬
梁玉林
周振森
尹建军
宋全厚
关键词:  反转录环介导等温扩增  志贺氏菌  ipaH基因  快速检测    
Abstract: This study aimed to establish a method using reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) for rapid detection of Shigella sp.. Multiple sets of primers were designed according to the specific conserved gene ipaH of genus Shigella. An optimized reaction system was established, and its accuracy, specificity, as well as sensitivity were evaluated using artificial contaminated samples. The results showed that RT-LAMP assay successfully detected ipaH within 30 min under isothermal conditions at 65 °C. In the viable/damage bacteria model, this method even showed suitable accuracy better than that of the national standard method. Only four strains from Shigella sp. were specifically detected from a mixture of 23 different bacterial standard strains. The detection sensitivity of Shigella RNA was 7 fg/μL. The detection sensitivity of artificially contaminated skimmed milk samples reached 40 CFU/g, which was two orders of magnitude higher than the RT-PCR method. This RT-LAMP assay could accurately detect genus Shigella. This assay was rapid, specific and sensitive, which could be used for rapid screening and on-site monitoring of Shigella sp..
Key words:  reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification    Shigella    ipaH    rapid detection
收稿日期:  2018-09-17                出版日期:  2019-02-25      发布日期:  2019-03-26      期的出版日期:  2019-02-25
作者简介:  硕士研究生(刘秀高级工程师和刘伯杨高级经理为共同通讯作者,E-mail:xiuliu1979@163.com;Liuboyang@mengniu.cn)。
引用本文:    
丁梦璇,刘秀,刘伯扬,等. 反转录-环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌[J]. 食品与发酵工业, 2019, 45(4): 193-199.
DING Mengxuan,LIU Xiu,LIU Boyang,et al. Rapid detection of Shigella sp. by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification[J]. Food and Fermentation Industries, 2019, 45(4): 193-199.
链接本文:  
http://sf1970.cnif.cn/CN/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018815  或          http://sf1970.cnif.cn/CN/Y2019/V45/I4/193
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