朱晓梦, 谷新晰, 陈广香, 王卫正, 田洪涛, 卢海强
漆酶在真菌毒素降解中发挥着越来越重要的作用,然而较高的价格及较差的稳定性严重制约了实际应用。为此,该研究通过交联酶聚集体(cross-linked enzyme aggregates,CLEAs)技术固定化漆酶,成功制备了漆酶交联聚集体(laccase cross-linked aggregates,PpLac-CLEAs),并系统评价了其催化性能。研究结果表明,0.52 g/mL的硫酸铵为沉淀剂,0.5%(体积分数)的戊二醛为交联剂,交联反应时间为4 h,所制得的PpLac-CLEAs的酶活力回收率为58.43%。固定化后,PpLac-CLEAs的最适pH 3.0,最适温度45 ℃;pH值为4.0~11.0,其相对酶活力均保持在90%以上,表现出更加宽泛的反应温度和pH范围。与游离酶相比,PpLac-CLEAs对Fe2+、Ag+和吐温-80的耐受性分别高了26.42%、44.68%和43.92%。另外,在重复使用 6 次后, PpLac-CLEAs可保持63.4%的酶活力。在4 ℃下贮存21 d后,其酶活力保留率为64.49%,是游离酶的3倍左右。经红外光谱分析进一步揭示,CLEAs固定化技术导致酶分子构象发生显著变化,α-螺旋含量增加3.6%,β-转角含量减少6.95%,结构刚性显著增强,这与其稳定性提高密切相关。在应用试验中,PpLac-CLEAs对玉米浆中的玉米赤霉烯酮降解率为29.47%。综上所述,PpLac-CLEAs展现出显著增强的稳定性、更低的使用成本,在真菌毒素降解领域中具有广阔的应用前景。